확인시험
LC기울기 용리KP3-elcatonin-i1- 검출기
- 가시부흡광광도계 (측정파장 440, 570 nm)
- 칼럼
- 양이온교환-SCX(수지)
스티렌디비닐벤젠공중합체에 설폰산기를 결합시킨 액체크로마토그래프용강산성이온교환수지
안지름 4 mm · 길이 8 cm · 입자경 3 μm
- 칼럼온도
- 50 ~ 65 ℃의 범위로 변화시킨다
- 이동상
- 시트르산일수화물
- 시트르산나트륨이수화물
- 수산화나트륨
- 염화나트륨
- 에탄올
- 티오디글리콜
- 정제수
- 유량
- 아르기닌의 유지시간이 약 75 분이 되도록 조정한다
- 화학반응조온도
- 화학반응조온도 : 130 ℃의 범위의 일정 온도
- 발색시간
- 발색시간 : 약 1 분
- 반응시약
- 반응시약 : 아세트산리튬이수화물 407 g, 아세트산(100) 245 mL 및 1-메톡시-2-프로판올 801 mL를 섞은 다 음 물을 넣어 2000 mL로 하고 약 20 분간 질소를 통하 면서 저어 섞어 A 액으로 한다. 따로 1-메톡시-2-프로 판올 1957 mL에 닌히드린 77 g 및 수소화붕소나트륨 78 -0.134 g을 넣고 약 20 분간 질소를 통하면서 저어 섞어 B 액으로 한다. A 액 및 B 액을 쓰기 전에 섞는다.
- 반응시액유량
- 반응시액유량 : 약 0.2 mL/분
- 칼럼의 선정
- 칼럼의 선정 : 표준액 10 μL를 가지고 위의 조건으로 조 작할 때 아스파라긴산, 트레오닌, 세린, 글루탐산, 프롤린, 글리신, 알라닌, 발린, 2-아미노수베르산, 류신, 티로신, 리신, 히스티딘, 아르기닌의 순서로 유출하고 각각의 피크 가 완전하게 분리하는 것을 쓴다.
약전이 허용하는 조건 조정 범위기울기 유출
- 이 조건의 L/dp 26,667 기준으로, 칼럼 길이와 입자크기를 L/dp 20,000 ~ 40,000 범위에서 조정할 수 있습니다(규정값의 −25 % ~ +50 %). 단위 µm/µm (칼럼길이 µm ÷ 입자경 µm).
- 전다공성 → 표면다공성(코어셸) 전환이 허용됩니다. 위 L/dp 범위를 벗어나더라도 (tR/wh)²가 규정 칼럼의 −25 % ~ +50 %면 다른 길이·입자크기 조합도 인정됩니다.
- 칼럼온도는 ± 5 ℃ 범위에서 조정할 수 있습니다.
다음은 허용되지 않습니다
- 고정상 치환기 변경 (예: C18 → C8). 지지체·표면수식 등 나머지 물리화학적 특성도 유사해야 합니다.
- 검출파장 변경
조정하려면 시스템적합성 적합과 관리대상 불순물의 선택성·용리순서 동등성 입증이 전제입니다. 위 범위를 벗어나면 재밸리데이션이 필요합니다.
기울기 유출은 재계산 3단계가 필요합니다
- L/dp에 맞게 칼럼길이 및 입자크기의 조정
- 입자크기와 칼럼안지름의 변경에 따른 유량조정 — F2 = F1×[(dc2²×dp1)/(dc1²×dp2)]
- 칼럼길이·안지름 및 유량의 변경에 따른 각 구간별 기울기시간의 조정 — tG2 = tG1×(F1/F2)×[(L2×dc2²)/(L1×dc1²)]
약전 조문 원문 보기
“칼럼의 입자크기와 길이는 칼럼의 길이(L)와 입자지름(dp)의 비가 일정하거나 규정된 L/dp비율의 – 25 %에서 + 50 % 범위일 때는 변경할 수 있다.”
“전체다공성입자(TPP) 칼럼에서 표면다공성입자(SPP) 칼럼으로의 변경은 상기 요건이 충족되는 경우는 허용된다.”
“치환기 본질의 변경은 인정되지 않는다(예를 들어 C18을 C8으로 변경하는 등).”
근거: 대한민국약전(식약처 고시 제2026-44호) [별표 5] 일반시험법(제2조제5호 관련), 79. 크로마토그래피 분리분석 총론, 4. 크로마토그래피 조건의 조정, 4.3. 기울기 유출. 이 안내는 조문을 조건에 대입해 정리한 참고 정보이며, 적용 여부의 판단과 책임은 시험을 수행하는 기관에 있습니다.
이 조건으로 메소드 전환 계산하기
이 조건의 칼럼 사양·유량이 크로마톡 계산기에 채워진 채로 열립니다.
고시 원문 보기 (축자)
검출기 : 가시부흡광광도계 (측정파장 440 nm 및 570 nm) 칼 럼 : 안지름 약 4 mm, 길이 약 8 cm인 스테인레스강 관에 3 μm의 스티렌디비닐벤젠공중합체에 설폰산기를 결합시킨 액체크로마토그래프용강산성이온교환수지를 충 전한다. 칼럼온도 : 50 ~ 65 ℃의 범위로 변화시킨다. 화학반응조온도 : 130 ℃의 범위의 일정 온도 발색시간 : 약 1 분 이동상 : 각각의 나트륨 이온농도가 0.10, 0.135, 1.26 및 0.20 mol/L인 완충액 A, B, C 및 D. 다만 완충액 A, B, C, 및 D를 써서 나트륨 이온농도로서 0.10 mol/L에서 1.26 mol/L까지 변화시킨다. 완충액의 조성 (g) A B C D 시트르산 8.85 7.72 6.10 - 일수화물 시트르산 3.87 10.05 26.67 - 나트륨 이수화물 수산화 - - 2.50 8.00 나트륨 염화나트륨 3.54 1.87 54.35 - 에탄올 60.0 mL - - 60.0 mL 티오디 5.0 mL 5.0 mL - - 글리콜 정제수 적당량 적당량 적당량 적당량 전체량 1000 mL 1000 mL 1000 mL 1000 mL 반응시약 : 아세트산리튬이수화물 407 g, 아세트산(100) 245 mL 및 1-메톡시-2-프로판올 801 mL를 섞은 다 음 물을 넣어 2000 mL로 하고 약 20 분간 질소를 통하 면서 저어 섞어 A 액으로 한다. 따로 1-메톡시-2-프로 판올 1957 mL에 닌히드린 77 g 및 수소화붕소나트륨 78 -0.134 g을 넣고 약 20 분간 질소를 통하면서 저어 섞어 B 액으로 한다. A 액 및 B 액을 쓰기 전에 섞는다. 이동상유량 : 아르기닌의 유지시간이 약 75 분이 되도록 조정한다. 반응시액유량 : 약 0.2 mL/분 칼럼의 선정 : 표준액 10 μL를 가지고 위의 조건으로 조 작할 때 아스파라긴산, 트레오닌, 세린, 글루탐산, 프롤린, 글리신, 알라닌, 발린, 2-아미노수베르산, 류신, 티로신, 리신, 히스티딘, 아르기닌의 순서로 유출하고 각각의 피크 가 완전하게 분리하는 것을 쓴다.
고시 원문의 표기·오탈자·조판 잔재를 고치지 않고 그대로 옮겼습니다. (원문 879 쪽)
상 분류 양이온교환-SCX(수지)근사 분류 — 확인 필요
충전제 표기만으로는 상 분류를 단정할 수 없어 근사 분류한 항목입니다. 아래 내용은 확정된 등가 판정이 아닙니다.