순도시험 2)
LCKP3-urokinase-p1원문 표제 단서: 혈액형물질
- 검출기
- 형광광도계 (측정파장 365, 460 nm)
- 칼럼
- 실리카(순상) · USP L3
액체크로마토그래프용다공질실리카겔
안지름 7.5 mm · 길이 60 cm · 입자경 10 ~ 12 μm
- 칼럼온도
- 20 ℃ 부근의 일정 온도
- 이동상
- 젤라틴
- 인산염완충액
- 유량
- 0.5 mL/분
- 장 치
- 장 치 : 이동상송액용펌프, 검체도입부, 칼럼, 반응시액송 액용펌프, 반응코일, 반응조, 형광광도계 및 기록장치를 쓰고 칼럼의 이동상 출구에 3방향 관을 달아 반응시약송 액용펌프 및 반을코일에 연결하고 반응코일 출구를 형광 광도계에 연결한다.
- 반응코일
- 반응코일 : 안지름 약 0.25 mm, 길이 약 150 cm인 스테 인레스강관
- 반응코일온도
- 반응코일온도 : 37 ℃
- 반응시약
- 반응시약 : 7-(글루타릴글리실-L-알기닐아미노)- 4 - 메틸쿠마린시액
- 반응시약유량
- 반응시약유량 : 0.75 mL/분
- 칼럼의 선정
- 칼럼의 선정 : 이 약에 수산화나트륨시액을 넣어 pH를 7.5로 조정한 다음 37 ℃에서 24 시간 이상을 방치한다. 여기에 젤라틴·인산염완충액을 넣어서 1 mL 중 20000 단위를 함유하도록 만든다. 이 액 100 μL를 가지고 위의 조건으로 조작할 때 분자량 54000인 고분자량유로키나 제, 분자량 33000인 저분자량유로키나제 순서로 유출하 고 분리도가 1.0 이상인 것을 쓴다.
약전이 허용하는 조건 조정 범위등용매 유출
- 전다공성 → 표면다공성(코어셸) 전환이 허용됩니다. 조문이 정한 L/dp 범위를 벗어나더라도 이론단수(N)가 규정 칼럼의 −25 % ~ +50 %면 다른 길이·입자크기 조합도 인정됩니다.
- 칼럼온도는 ± 10 ℃ 범위에서 조정할 수 있습니다.
다음은 허용되지 않습니다
- 고정상 치환기 변경 (예: C18 → C8). 지지체·표면수식 등 나머지 물리화학적 특성도 유사해야 합니다.
- 검출파장 변경
조정하려면 시스템적합성 적합과 관리대상 불순물의 선택성·용리순서 동등성 입증이 전제입니다. 위 범위를 벗어나면 재밸리데이션이 필요합니다.
약전 조문 원문 보기
“전다공성→표면다공성 전환 시 이론단수(N)가 규정된 칼럼의 – 25 %에서 + 50 % 범위에 있으면 다른 L과 dp의 조합도 사용할 수 있다.”
“치환기의 변경은 인정되지 않는다(예를 들어 C18을 C8으로 변경하는 등). 고정상의 기타 물리화학적 특성, 즉 크로마토그래피 지지체, 표면수식, 화학수식은 유사해야 한다.”
근거: 대한민국약전(식약처 고시 제2026-44호) [별표 5] 일반시험법(제2조제5호 관련), 79. 크로마토그래피 분리분석 총론, 4. 크로마토그래피 조건의 조정, 4.2. 등용매 유출. 이 안내는 조문을 조건에 대입해 정리한 참고 정보이며, 적용 여부의 판단과 책임은 시험을 수행하는 기관에 있습니다.
이 조건으로 메소드 전환 계산하기
이 조건의 칼럼 사양·유량이 크로마톡 계산기에 채워진 채로 열립니다.
고시 원문 보기 (축자)
장 치 : 이동상송액용펌프, 검체도입부, 칼럼, 반응시액송 액용펌프, 반응코일, 반응조, 형광광도계 및 기록장치를 쓰고 칼럼의 이동상 출구에 3방향 관을 달아 반응시약송 액용펌프 및 반을코일에 연결하고 반응코일 출구를 형광 광도계에 연결한다. 검출기 : 형광광도계 (여기파장 : 365 nm, 측정파장 : 460 nm) 칼 럼 : 안지름 약 7.5 mm, 길이 약 60 cm인 스테인레 스강관에 10 ~ 12 μm의 액체크로마토그래프용다공질 실리카겔을 충전한다. 칼럼온도 : 20 ℃ 부근의 일정 온도 반응코일 : 안지름 약 0.25 mm, 길이 약 150 cm인 스테 인레스강관 반응코일온도 : 37 ℃ 이동상 : 젤라틴·인산염완충액 유 량 : 0.5 mL/분 반응시약 : 7-(글루타릴글리실-L-알기닐아미노)- 4 - 메틸쿠마린시액 반응시약유량 : 0.75 mL/분 칼럼의 선정 : 이 약에 수산화나트륨시액을 넣어 pH를 7.5로 조정한 다음 37 ℃에서 24 시간 이상을 방치한다. 여기에 젤라틴·인산염완충액을 넣어서 1 mL 중 20000 단위를 함유하도록 만든다. 이 액 100 μL를 가지고 위의 조건으로 조작할 때 분자량 54000인 고분자량유로키나 제, 분자량 33000인 저분자량유로키나제 순서로 유출하 고 분리도가 1.0 이상인 것을 쓴다.
고시 원문의 표기·오탈자·조판 잔재를 고치지 않고 그대로 옮겼습니다. (원문 930 쪽)
상 분류 실리카(순상)USP L3 상당