전혈 칸나비노이드 12종 LC-MS/MS - Phree 인지질 제거와
Luna Omega 3 µm Polar C18
TN-1430 · Phenomenex Technical Note · 2026
30초 요약
같은 침전, 인지질 제거만 다르게
단백질 침전 상등액을 그대로 주입한 시료와 Phree 카트리지를 한 번 더 거친 시료를 나란히 비교했습니다
면적비가 크게 흔들린 4종
침전만 한 시료에서 THCV·CBD·Δ8-THC·CBC의 면적비가 표준용액 대비 225~297%, Phree 시료는 90~106%였습니다
건조 단계 없이 바로 주입
Polar C18의 머무름 덕분에 용출액을 농축하지 않고 주입했다고 원문은 적습니다. 분석은 10분 구배입니다
🛋️ The Interpreter: 기술 용어 쉽게 풀기
🌿 왜 인지질이 문제인가 (원문 서론 범위)
원문은 THC 외 다른 주요 칸나비노이드에 대한 연구 관심을 배경으로 들고, 칸나비노이드가 소수성이 매우 커 역상에서 늦게 나오는데 인지질도 같은 구간에 나온다는 점을 문제로 꼽습니다. 겹치는 구간에서 매트릭스 효과·이온 억제가 생길 수 있어, 인지질 제거 카트리지를 쓰는 간단한 전처리로 이를 줄였다는 것이 원문 서론의 요지입니다.
📐 「면적비 %」 읽는 법
원문 Table 1의 값은 (추출 시료의 분석물/내부표준 면적비) ÷ (표준용액의 같은 면적비)입니다. 100%면 전혈 매트릭스가 정량값을 흔들지 않았다는 뜻이고, 100%에서 멀수록 내부표준이 매트릭스 영향을 다 보정하지 못한 것입니다(컬럼피아 해석). 내부표준은 두 가지뿐입니다 — 용출 순서상 CBDVA~THC-COOH는 THC-COOH-D9, THCA-A~CBC는 Δ9-THC-D3.
조건 요약
| 항목 | 원문 조건 |
|---|---|
| 시료 | EDTA 사람 전혈(풀) 250 µL |
| 단백질 침전 | 볼텍스 중 내부표준 20 µL가 든 차가운 ACN 1000 µL를 천천히 첨가 → 13,500 rpm 10분 원심분리 → 상등액 분리 |
| 인지질 제거 | 상등액에 진한 포름산 15 µL → Phree 카트리지(8B-S133-TAK, Tabbed 1 mL Tubes) 적재 → 진공 → 용출액을 그대로 주입 |
| 비교군 | 단백질 침전 상등액을 Phree 없이 바로 분석 |
| 분석 컬럼 | Luna Omega 3 µm Polar C18 · 50 × 2.1 mm (00B-4760-AN) · 완전다공성 |
| 이동상 | A: 10 mM 포름산암모늄 수용액 · B: 메탄올 |
| 구배 | %B 50(0 min) → 95(5) → 95(7) → 50(7.1) → 50(10) |
| 유속 · 주입 · 온도 | 0.4 mL/min · 10 µL · 40 °C |
| LC · MS/MS | Agilent 1260 HPLC · SCIEX Triple Quad 4500(원문 표기 Sciex) |
| 이온화 | ESI 음이온 · 소스 600 °C · GS1 50 psi · GS2 50 psi · CUR 25 psi · IS −4500 V |
| 회수율 시험 | 100 ng/mL · 추출 전 첨가 ÷ 추출 후 첨가 평균 면적 (각 N=3) |
※ 동중(같은 Q1) 4군은 원문 MRM 표 기준 m/z 285.2(CBDV·THCV), 313.2(CBC·CBD·Δ8-THC·Δ9-THC), 329.2(CBDVA·THC-OH), 357.2(CBDA·THCA-A)입니다(컬럼피아 정리). 검량 범위·직선성·LOQ·정밀도는 원문에 별도 수록되지 않았습니다.
분석물 16개(내부표준 포함)의 MRM 파라미터 전체(Q1·Q3 정량/확인·DP·EP·CE·CXP)와 인지질 모니터링 MRM 8개(원문 Table 2)는 원문 표에 있습니다. 이 페이지는 옮기지 않았습니다.
TN-1430 원문 보기결과: 인지질이 남으면 면적비가 어디까지 벗어나나
원문 Table 1 "Effects of Phospholipids on Area Ratios" — 추출 시료 면적비 ÷ 표준용액 면적비. 굵은 값은 원문에서도 굵게 표시된 값입니다.
| 분석물 | RT (min) | 단백질 침전만 | + Phree |
|---|---|---|---|
| CBDVA | 3.11 | 132% | 101% |
| CBDA | 3.91 | 109% | 98% |
| CBGA | 4.07 | 98% | 87% |
| CBG | 4.08 | 110% | 87% |
| CBDV | 4.34 | 100% | 89% |
| THC-COOH | 4.38 | 91% | 92% |
| THCA-A | 4.68 | 121% | 103% |
| THC-OH | 4.69 | 107% | 99% |
| THCV | 4.98 | 276% | 90% |
| CBD | 4.99 | 297% | 106% |
| CBN | 5.42 | 59% | 91% |
| Delta-9-THC | 5.57 | 76% | 70% |
| Delta-8-THC | 5.65 | 227% | 94% |
| CBC | 5.79 | 225% | 97% |
※ 원문 본문은 침전 시료의 증가폭을 "127-197%"로 적었습니다. 표의 굵은 4종 값에서 100%를 빼면 THCV 176, CBD 197, Δ8-THC 127, CBC 125(%p)로, CBC가 본문 하한(127)보다 2 낮습니다(컬럼피아 계산). 원문 표기를 그대로 두고 여기에 밝힙니다.
※ 원문은 Phree 시료가 표준용액과 "± 10%" 안에서 일치했다고 적고, 예외로 Δ9-THC를 듭니다. 굵은 4종의 Phree 값은 90~106%입니다. 다만 표 전체로 보면 CBGA·CBG(87%), CBDV(89%)도 90%에 못 미칩니다(컬럼피아 대조).
원문 본문이 따로 짚은 수치
- Δ9-THC: 매트릭스 효과(원문 표기)가 침전 시료 32%, Phree 시료 101%. 전용 중수소 내부표준 Δ9-THC-D3로 보정한 면적비는 각각 76%, 70%로, 원문은 이를 "some normalization"이라 적었습니다. 매트릭스 효과의 계산식과, Phree 쪽 면적비가 침전 쪽보다 낮은 이유는 원문에 별도 수록되지 않았습니다.
- CBN(Δ9-THC 가까이 용출): 면적비가 침전 시료 59%, Phree 시료 91%.
- 회수율: 두 전처리 간 차이가 Δ9-THC(20%)를 뺀 모든 분석물에서 1~13%였다고 적었습니다. 분석물별 회수율 값 자체는 원문에 표로 수록되지 않았습니다.
Figure 7. Phospholipid Comparisons
왼쪽이 단백질 침전만 한 시료(Protein precipitation only), 오른쪽이 Phree를 거친 시료(After phospholipid removal)의 인지질 MRM 크로마토그램입니다. 두 패널의 세로축 눈금이 다릅니다 — 왼쪽 최댓값 1.05e7 cps, 오른쪽 1.15e6 cps로 약 9배 차이(컬럼피아 판독)이므로, 봉우리 높이를 눈으로 바로 비교하면 차이를 과소평가하게 됩니다. 원문은 이 비교를 정성적(qualitative)이라고 밝혔고, 선 색과 인지질 MRM의 대응은 그림에 표시되어 있지 않습니다.
Figure 5. Extracted Chromatogram of CBDVA, THC-OH
같은 Q1(m/z 329.2)을 쓰는 CBDVA와 THC-OH의 추출 크로마토그램입니다. 그림 라벨은 3.12분과 4.69분이며, Table 1의 RT(CBDVA 3.11, THC-OH 4.69분)와 대조하면 앞이 CBDVA, 뒤가 THC-OH입니다(컬럼피아 대조). 원문은 이동상 A를 0.1% 포름산 대신 10 mM 포름산암모늄 수용액으로 바꿔 두 성분의 분리를 높였다고 적었지만, 포름산 조건의 크로마토그램은 싣지 않았습니다.
싣지 않은 그림 — 전체 대표 크로마토그램(Figure 1), 5 ng/mL의 CBG·CBD·CBN(Figure 2), 나머지 동중 분리 그림 3장(Figure 3·4·6: CBDV/THCV, CBD/Δ9-THC/Δ8-THC/CBC, CBDA/THCA-A)과 주문 정보는 원문에서 확인하십시오.
TN-1430 원문 보기데이터 해석 및 실무 제언
- 100%를 넘는 면적비는 「회수율이 좋다」가 아닙니다. 면적비는 분석물 ÷ 내부표준이라, 내부표준이 분석물보다 더 억제되면 100%를 넘을 수 있습니다(컬럼피아 해석 — 원문은 기전을 따로 설명하지 않음). 원문 고찰의 요지는 방향과 상관없이, 성분마다 전용 내부표준을 두지 않고 적은 수의 내부표준으로 보정하면 이온 억제가 정확히 보정되지 않을 수 있다는 것입니다.
- 전용 내부표준이 없는 늦은 용출 성분일수록 전처리가 중요합니다. 원문은 늦게 나오는 성분 대부분에 상용 안정동위원소 표지 내부표준이 없다고 적고, 그래서 매트릭스 효과를 줄이는 것이 정확한 정량에 중요하다고 결론짓습니다. 내부표준을 성분마다 갖춘 랩이라면 이 비교 결과의 무게가 달라질 수 있습니다(컬럼피아 해석).
- Phree는 분석 컬럼이 아니라 전처리입니다. 이 방법에서 분리를 맡은 것은 Luna Omega 3 µm Polar C18(완전다공성)이고, Phree는 침전 상등액에서 인지질을 걸러 내는 단계입니다. 원문은 Polar C18의 머무름이 충분해 고유기 용출액을 건조 없이 바로 주입할 수 있었다고 적습니다 — 다른 컬럼으로 옮기면 이 점부터 다시 확인해야 합니다(컬럼피아 실무 의견).
- 용도 범위를 지키세요. 원문은 "FOR RESEARCH USE ONLY. Not for use in clinical diagnostic procedures."로 명시합니다. 이 페이지는 분석법 해설이며, 칸나비노이드 농도의 판정 기준이나 법적 판단은 다루지 않습니다.
결정 가이드: 침전만으로 충분할까, 인지질 제거를 더할까
인지질 제거를 더하는 쪽을 먼저 검토할 때
- •분석물 수보다 내부표준 수가 훨씬 적다(원문은 14개 분석물에 2개)
- •관심 성분이 인지질이 나오기 시작하는 구간(원문 약 5분 이후)에 몰려 있다
- •건조·재용해 단계를 늘리고 싶지 않다
원문만으로는 판단할 수 없는 것
- •검량 범위·LOQ·정밀도 — 원문에 없으므로 자체 검증 필요
- •여러 로트의 전혈 간 차이 — 원문은 풀 전혈 한 가지
- •다른 분석 컬럼에서의 동중 분리 — 원문은 Polar C18 한 가지
참고 자료 및 원문
TN-1430: Analysis of 12 Cannabinoids in Whole Blood by LC-MS/MS
Tim Fassette, Laura Snow, Genevieve Hudson (Phenomenex, Inc.)
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