단백질 침전 + 인지질 동시 제거 솔루션
Phree는 생체 시료(혈장, 혈청) 분석 시 단백질 제거(Protein Removal), 인지질 제거(Phospholipid Elimination), 그리고 메소드 개발 불필요(No Method Development)라는 3가지 이점을 동시에 제공하는 전처리 제품입니다.
Solvent Shielding Technology를 적용하여 유기 용매의 드리핑(Dripping)을 방지하고, Phree 내부에서 단백질 침전(Protein Precipitation)이 이루어집니다. 별도의 메소드 개발 없이 튜브와 96-Well 플레이트 모두 동일한 방법으로 사용할 수 있습니다.
2. 핵심 성능 및 이점 (Key Performance)
LC-MS/MS 분석에서 인지질에 의한 이온 억제 문제를 해결하는 구체적인 데이터입니다.
Solvent Shielding Technology
유기 용매의 드리핑을 방지하여 Phree 내부에서 단백질 침전이 완료됩니다. 별도 침전 단계가 필요 없습니다.
인지질 98% 이상 감소
기존 단백질 침전 대비 인지질 피크 면적이 >98% 감소합니다 (WIL Research 평가 데이터 기준).
확장된 인지질 용량
최대 400 µL 혈장까지 유의미한 파과(Breakthrough) 없이 인지질을 제거할 수 있습니다.
One Method for All
튜브와 96-Well 플레이트 모두 동일한 프로토콜을 사용합니다. 별도의 메소드 개발이 필요 없습니다.
3. 기술 사양 (Technical Specifications)
Phree 제품 포맷, 용량, 용매 조건 및 주문 정보입니다.
제품 포맷 및 주문 정보
| Part Number | 제품 설명 | 포장 단위 |
|---|---|---|
| 8B-S133-TAK | Phree 1 mL Tube | 100/box |
| 8E-S133-TGB | Phree 96-Well Plates | 2/box |
시료 및 용매 조건
| 항목 | 조건 |
|---|---|
| 혈장 로딩량 (96-Well Plate) | 25 - 400 µL |
| 혈장 로딩량 (Tube) | 25 - 200 µL |
| 유기 용매 옵션 1 | Acetonitrile + 1% Formic acid (300 µL) |
| 유기 용매 옵션 2 | Methanol + 1% Formic acid (400 µL) |
| 여과 방법 | 원심분리 / 진공 / 양압(Positive Pressure) |
LC-MS/MS 분석 조건 (App ID 20011)
| 항목 | 조건 |
|---|---|
| 컬럼 | Kinetex 2.6 µm C18 100 A, 50 x 2.1 mm (Part No. 00B-4462-AN) |
| 이동상 A | 0.1% Formic acid in Water |
| 이동상 B | 0.1% Formic acid in Methanol |
| 그래디언트 | 0 min / 60% B, 0.5 / 95, 15.5 / 95, 15.51 / 60, 19.5 / 60 |
| 유속 | 400 µL/min |
| 온도 | 22 °C |
| 검출 | MS @ 425 °C; 184 amu |
4. 성능 비교 데이터 (Performance Comparison)
인지질 제거 성능과 컬럼 수명 보호 효과에 대한 실험 데이터입니다.
인지질 프로파일 비교
기존 단백질 침전(Protein Precipitated Plasma) 대비 Phree 처리 시료에서 인지질이 현저히 감소합니다(m/z 184 모니터링; 미량 잔류를 드러내기 위해 비교 그래프는 y축 약 50배 확대 표시).
Lysophosphatidylcholines와 Phosphatidylcholines 등 모든 클래스의 인지질을 제거합니다.
타사 제품과의 비교 (제조사 브로슈어 기준)
Agilent Captiva NDLipids·Supelco HybridSPE 대비 모든 클래스의 인지질 잔류량이 가장 낮게 나타났습니다(제조사 브로슈어 비교 그래프 기준, 미량 잔류 표시용 약 25배 확대).
Waters Ostro 대비 더 큰 인지질 로딩 용량이 보고되었습니다(제조사 비교 그래프 기준; 혈장 최대 400 µL까지 유의한 breakthrough 없이 처리; 비교 그래프 약 40배 확대. Ostro는 웰 용량상 최대 350 µL 처리 권장).
컬럼 수명 보호
Phree로 전처리한 시료는 약 5,000 µL 혈장 주입 후에도 유의미한 감도 손실 없이 분석이 가능합니다.
250회 주입 테스트에서 Phree 처리 시료는 감도를 유지한 반면, 기존 단백질 침전 시료는 즉각적인 감도 손실을 보였습니다.
회수율 (Recovery)
회수율 프로브(ABN 패널): 산성 Naproxen · 염기성 Amitriptyline, Metoprolol · 중성 Acetaminophen, Prednisone
제네릭 Phree 방법에서는 일부 화합물의 회수율이 다소 낮을 수 있으나, 2차 용출 또는 용매:시료 비율 최적화(8:1·13:1)로 회수율을 향상시킬 수 있습니다(TN-0058).
5. 주요 응용 분야 (Applications)
생물학적 분석 (Bioanalysis)
혈장 및 혈청 시료의 LC-MS/MS 분석 전처리. 인지질에 의한 이온 억제(Ion Suppression) 문제를 근본적으로 해결합니다.
임상 연구 (Clinical Research)
임상 시료의 약물 농도 정량 분석. 높은 회수율과 재현성으로 신뢰성 있는 데이터를 제공합니다.
약동학 (Pharmacokinetics)
PK 연구에서의 시료 전처리. 컬럼 수명을 보호하여 대량 시료 분석 시에도 안정적인 감도를 유지합니다.
6. 사용 프로토콜 (Protocol)
간단한 4단계로 단백질 침전과 인지질 제거를 동시에 수행합니다.
혈장 분주 (Dispense)
Phree에 혈장 시료를 분주합니다 (25 - 400 µL).
유기 용매 추가 (Add Solvent)
ACN + 1% FA (300 µL) 또는 MeOH + 1% FA (400 µL)를 추가합니다.
혼합 (Mix)
시료와 유기 용매를 혼합하여 단백질을 침전시킵니다.
여과 (Filter)
원심분리, 진공, 또는 양압으로 여과하여 정제된 시료를 수집합니다.
7. 전문가 팁 (Expert Tips)
Tip 1.용매 선택 가이드
Acetonitrile(ACN)은 300 µL로 사용하며, 일반적인 소분자 약물 분석에 적합합니다. Methanol(MeOH)은 400 µL로 사용하며, 극성이 높은 화합물 분석 시 유리할 수 있습니다. 두 용매 모두 1% Formic acid를 첨가하여 사용합니다.
Tip 2.혈장 용량 최적화
96-Well 플레이트에서는 최대 400 µL, 튜브에서는 최대 200 µL까지 로딩할 수 있습니다. 인지질 용량 테스트 결과, 400 µL까지 유의미한 파과 없이 안정적인 인지질 제거가 확인되었습니다. 분석 감도가 충분하다면 소량의 혈장(25-100 µL)으로도 사용 가능합니다.
Tip 3.컬럼 수명 보호 효과
Phree 처리 시료로 약 5,000 µL 혈장을 주입해도 감도 손실이 거의 없으며, 250회 연속 주입 테스트에서도 안정적인 성능을 유지합니다. 기존 단백질 침전만 수행한 시료는 초기 주입부터 감도가 저하됩니다.
8. 조건별 선택 도구 (Interactive Selector)
시료 매트릭스와 분석 목적을 넣으면 Phree와 Impact 중 어느 쪽이 맞는지, 용매 조성과 비율·처리 부피는 얼마인지 계산해 줍니다.
이 도구의 수치·조건·품번은 Phenomenex 원문과 대조 검증을 거쳤습니다(2026-09-22). 배지가 보증하는 범위는 「화면의 내용이 원문과 일치하는가」까지이며, 실제 조건에서 확인한 뒤 적용하세요.
Phospholipid Removal SelectorPhree™ vs Impact™
Plasma·serum bioanalysis에서 인지질(Phospholipids)이 일으키는 LC-MS ion suppression·column lifetime 저하·matrix effect를 해결하는 방법을 추천합니다. Phenomenex Phree™ (단백질+인지질 동시 제거)와 Impact™ (단백질만 제거)를 작업 프로파일에 따라 매핑합니다.
본 도구는 교육·참고 목적입니다. Phenomenex 원문 여러 종의 핵심 요약만 제공합니다 — Sample Prep Guide pp.12–25 · Phree User Guide · Phree FAQs · TN-0055/0058/0065 · Impact Product Guide. 실제 분석 전 application note·각 시료의 회수율·matrix effect 검증을 수행하세요.
Step 1 — 작업 프로파일 선택
Step 2 — 시료 종류
Step 3 — 제품 선택
Step 4 — Format & Sample Volume
Step 5 — 최종 추천
- 단백질 + 인지질 동시 제거 (PPT 1단계 + 인지질 cleanup)
- Ion suppression 영역 인지질 선택적 제거 (원본 차트상 near-baseline)
- Column lifetime 향상 (원문: 250회에서도 감도 감소가 소폭 — 단 이는 TN-0055의 diclofenac 한 물질 결과다. TN-0058의 acetaminophen에서는 Phree 처리 시료도 주입 누적에 따라 크게 감소한다)
- 메소드 개발 단순화 — Acid/Base/Neutral 1 method
- Impact 대비 비용 ↑
- 매트릭스별 회수율은 직접 검증 필요 — 단 Phree FAQs는 「Plasma, serum, and tissue homogenates can be processed using Phree」라고 적는다(「plasma만 검증됐다」는 서술은 원문과 다르다)
- 일부 매우 hydrophobic 분석물에서 비특이 흡착 가능 → 사전 회수율 검증
Step 6 — Sample Prep (4-step) + Inject (8E-S133-TGB)
단백질 + 인지질 동시 제거 (PPT 4-step + LC-MS Inject)
Phree vs Impact 비교
| 항목 | Phree™ | Impact™ |
|---|---|---|
| 단백질 제거 | ✅ 완전 제거 | ✅ 완전 제거 |
| 인지질 제거 | ✅ 선택적 제거 | ❌ 잔존 |
| Ion Suppression | 거의 0 | 잔존 |
| Column Lifetime (TN-0055 250 inj — 비교 대상은 «일반 원심 침전»이며 Impact 플레이트가 아니다) | 250회에서 소폭 감소 | 200회 후 완전 상실 |
| 비용 | ↑ (Premium) | ↓ (경제적) |
| Workflow 단계 수 | 4-step | 4-step (동일) |
| Format | 96-well + 1 mL Tube | 96-well only |
| 최적 시나리오 | Sensitive MS · long sequence | Routine · short sequence |
회수율 비교 — Phree vs SPE (Sample Prep Guide BR27940322_W p.23 차트, N=5)
원본은 수치 표가 아닌 막대 차트로, 6종(amitriptyline·metoprolol[basic], acetaminophen·prednisone[neutral], diclofenac·naproxen[acidic])의 절대 회수율을 Phree · Waters® Oasis® HLB · Biotage® Evolute® ABN과 비교합니다. 차트가 지지하는 결론:
- Phree는 6종 모두 ~70% 기준선 이상 회수율 유지 (acid/base/neutral 일관 — one method).
- Waters Oasis HLB는 acidic(diclofenac·naproxen)에서 70% 미만으로 크게 저하.
- Biotage Evolute ABN은 neutral(acetaminophen)에서 70% 미만으로 저하.
※ p.23 차트는 «개별 화합물의 수치를 표기하지 않는다» — 70% 기준선과 「N=5 for all cleanup techniques」만 인쇄돼 있다. 같은 실험을 다룬 TN-0065는 집계 수치를 글로 적는다: 「Phree exhibited a 72-108 % range in recovery with an average CV % of only 7.24 % (n=5 for each compound)」. 본 도구가 화합물별 % 값을 제시하지 않는 것은 그 값이 원문에 없기 때문이다. ※ Phenomenex는 Waters/Biotage와 무관한 독립 비교이며, comparative separations may not be representative of all applications.
주의사항
- 본 도구는 교육·참고 목적입니다. 실제 분석 전 application note·각 분석물의 회수율·matrix effect 검증을 수행하세요.
- Phree FAQs는 「Plasma, serum, and tissue homogenates can be processed using Phree」라고 적는다. 다만 매트릭스별 회수율을 원문이 모두 제시하지는 않으므로 각자 검증할 것. Serum·whole blood·tissue·urine 등 다른 매트릭스는 사전 회수율 검증 필수.
- Acetonitrile + 1% formic acid가 Phree 표준 용매. Methanol 사용 시 회수율 변동 가능 (특히 acidic/neutral 분석물).
- 비특이 흡착: 매우 hydrophobic 분석물은 Phree sorbent에 흡착될 가능성. ※ 원문(TN-0058)은 「some target compounds may exhibit lower analyte recoveries」라고만 적고 logP 임계값을 제시하지 않는다. ※ 원문은 오히려 「Phree selectively removes phospholipids without interacting with target analytes」라 적고 저회수 원인을 sorbent bed·frit 잔류 부피로 든다 — 「hydrophobic 분석물의 sorbent 흡착」은 본 도구의 추론이다. 사전 spike-recovery test 수행.
- Format 선택: 96-well plate(자동화) 또는 1 mL tube(소량·manual). 자동화 시 positive pressure manifold 권장.
- Phree vs Impact 비용: Phree가 단가 ↑이지만 column lifetime 향상(원본 250회 실험)·재분석 감소로 TCO(total cost of ownership)는 long sequence에서 Phree가 유리.
- 다른 매트릭스 효과: 인지질 외의 성분도 ion suppression을 유발할 수 있다. ※ SDS·heparin 같은 구체명은 Phree 원문에 없는 일반 지식이다. Phree만으로 부족할 시 SLE 또는 SPE 추가.
- Part Number: Phenomenex 카탈로그 기준이며 주문 전 공식 채널에서 재확인 필수. 상표(Phree™, Impact™)는 Phenomenex의 자산이며 본 도구의 표기는 교육 목적의 nominative fair use입니다.
출처·저작권 및 상표 고지
이 페이지는 Phenomenex, Inc.가 공개한 기술 자료(애플리케이션 노트·테크니컬 노트·브로셔·카탈로그 등)를 바탕으로 컬럼피아(㈜성문시스텍)가 한국 분석 실무자를 위해 번역·해설·재구성한 것입니다. 원자료의 저작권은 Phenomenex, Inc.에 있으며, 한글 해설·구성의 저작권은 ㈜성문시스텍에 있습니다. 수치와 조건은 원자료가 제시한 시험 조건에서 얻은 값이며, 개별 제품의 최종 사양은 해당 제품의 사양서를 따릅니다.
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타사 제품과의 비교 결과와 대체 안내는 원자료에 기재된 시험 조건에서 얻은 값이며, 컬럼피아가 독자적으로 재현·검증한 것이 아닙니다. 충전제·선택성·하드웨어는 제품마다 다르므로 대체 후보가 타사 제품과 동일한 성능·선택성을 낸다고 보증하지 않으며, 실제 적용 전 사용자가 자신의 시험법에서 직접 검증해야 합니다.