혈장 스테로이드 7종 SLE 추출 - Novum PRO SLE 96웰 플레이트
(에틸아세테이트 용출 · 절대 회수율 80~115 % · Kinetex 5 µm Biphenyl LC-MS/MS, AN-1000)
AN-1000 · Phenomenex Application Note (© 2021)
30초 요약
로딩 → 용출, 두 줄짜리 방법
첨가 혈장 200 µL + 인산나트륨 완충액 200 µL를 Novum PRO MAX 96웰에 올리고 에틸아세테이트 900 µL로 두 번 용출합니다. 원문 SLE Method에 적힌 작업은 표준 첨가·로딩·용출뿐입니다
절대 회수율 80~115 %, %CV 6~15
코르티솔 80 %·코르티손 82 %가 낮은 쪽이고, 나머지 5종은 105~115 %로 100 %를 넘습니다. 원문은 100 % 초과를 따로 설명하지 않습니다
5분 구배, 마지막 성분 2.81분
Kinetex 5 µm Biphenyl 50 x 4.6 mm에서 코르티솔 0.94분 ~ 프로게스테론 2.81분. 11-데옥시코르티코스테론 (1.79분)과 테스토스테론(1.81분)은 RT가 0.02분 차이입니다
🛋️ The Interpreter: 기술 용어 쉽게 풀기
🧽 SLE와 «Novum PRO»
원문 제목은 SLE를 Simplified Liquid Extraction으로 풉니다. 수용성 시료를 흡착 매체에 펼쳐 두고 물과 섞이지 않는 유기 용매(이 원문에서는 에틸아세테이트)로 분석물을 빼내는 방식으로, 분액 깔때기의 흔들기·층 분리 단계가 없습니다(컬럼피아 해설). 원문 개요는 Novum PRO SLE 96웰 플레이트가 합성(synthetic) SLE 매체를 쓴다고 적었습니다. 제품 표기는 개요에서 «Novum PRO SLE 96-well plates», 방법에서 «Novum PRO MAX 96-Well Plate»로 원문대로 둡니다.
📊 «% Absolute Recovery»와 «% CV»
절대 회수율은 넣은 양 대비 최종 측정된 양의 비율을, %CV는 반복 측정값의 흩어짐(표준편차 ÷ 평균)을 뜻하는 것이 일반적입니다(컬럼피아 해설). 이 원문은 절대 회수율의 계산식(무엇과 비교했는지)과 반복 수를 싣지 않았으므로, 100 %를 넘는 값이 무엇 때문인지는 원문만으로 판단할 수 없습니다.
⚙️ MS 조건표의 약어 CAD·CUR·GS1·GS2·IS·TEM
원문 MS Conditions 표는 약어와 값만 싣고 뜻·단위는 적지 않았습니다. 일반적으로 CAD는 충돌 가스, CUR는 커튼 가스, GS1·GS2는 이온 소스 가스 1·2, IS는 이온 스프레이 전압, TEM은 소스 온도 설정을 가리키는 약어로 쓰입니다(컬럼피아 해설). 기기마다 단위와 설정 범위가 다르므로 값을 옮겨 쓰기 전에 우리 랩 기기의 설정 항목과 맞춰 보십시오.
조건 요약 — SLE 방법과 LC-MS/MS 조건 (원문 1쪽)
| SLE Method | 원문 표기 |
|---|---|
| Pre-treatment | 190 µL plasma with 10 µL spike standards solution |
| 96-Well Plate | Novum PRO MAX 96-Well Plate (Part No. 8E-S539-5GA) |
| Load | 200 µL spiked plasma + 200 µL Sodium phosphate buffer |
| Elution | 2x 900 µL Ethyl acetate |
| MS Conditions | Value (원문 단위 미기재) |
|---|---|
| CAD | 3 |
| CUR | 26 |
| GS1 | 60 |
| GS2 | 60 |
| IS | 5500 |
| TEM | 640 |
| LC Conditions | 원문 표기 |
|---|---|
| Column | Kinetex 5 µm Biphenyl, 50 x 4.6 mm (00B-4627-E0) |
| Mobile Phase | A: Water / B: Methanol |
| Gradient (min, %B) | 0 → 80 · 1.5 → 95 · 3 → 95 · 3.1 → 80 · 5 → 80 |
| Flow Rate · Temperature | 1 mL/min · Ambient |
| Injection | 1 µL |
| Detection | 6500+ MS/MS (ESI+) |
| System | Agilent Technologies 1200 Series |
※ 첨가 혈장 200 µL는 혈장 190 µL + 표준 용액 10 µL와 같은 양이고, 용출 용매는 웰당 에틸아세테이트 1.8 mL입니다 (컬럼피아 계산). 원문은 표준 첨가 농도, 내부표준, 인산나트륨 완충액의 농도·pH, 혈장과 완충액을 미리 섞는지 여부, 로딩 후 대기·진공 조건, 용출액의 증발·재용해 조건, MRM 전이를 싣지 않았습니다. Kinetex 5 µm Biphenyl은 원문 개요 표기대로 코어셸(Core-Shell) LC 컬럼입니다.
조건 상자 원본(SLE Method·LC Conditions·MS Conditions)은 원문 1쪽에 한 면으로 정리되어 있습니다. 재현 전에 원문 표기를 직접 확인하십시오.
Phenomenex 원문 페이지 (AN-1000)결과 요약 — 절대 회수율(원문 Table 1)과 RT(Figure 1 표)
| 피크 | 분석물 | RT (min) | % Absolute Recovery | % CV |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Cortisol (코르티솔) | 0.94 | 80 | 15 |
| 2 | Cortisone (코르티손) | 1.12 | 82 | 12 |
| 3 | Corticosterone (코르티코스테론) | 1.68 | 106 | 6 |
| 4 | 11-deoxycorticosterone (11-데옥시코르티코스테론) | 1.79 | 106 | 6 |
| 5 | Testosterone (테스토스테론) | 1.81 | 114 | 10 |
| 6 | 17-OH progesterone (17-OH 프로게스테론) | 2.36 | 115 | 14 |
| 7 | Progesterone (프로게스테론) | 2.81 | 105 | 14 |
※ 회수율·%CV는 제조사(Phenomenex) 애플리케이션 노트 Table 1의 값이며 컬럼피아가 재현한 값이 아닙니다. 표는 Figure 1 피크 번호 순으로 다시 늘어놓았습니다(원문 Table 1은 17-OH Progesterone부터 시작하는 다른 순서). 100 %를 넘는 값은 굵게 표시했습니다.
Figure 1. Representative Chromatogram of Steroid Panel
7종 대표 크로마토그램과 원문 Analytes 표(피크 번호·RT)입니다. 그림의 피크에는 번호가 인쇄되어 있지 않으므로 피크 동정은 그림 아래 Analytes 표의 RT로 합니다. 1.8분 부근의 가장 높은 피크 묶음에는 11-데옥시코르티코스테론(1.79분)과 테스토스테론(1.81분)이 함께 있습니다(RT 표 기준). 원문은 첨가 농도를 싣지 않았으므로 피크 높이로 성분 간 감도를 비교할 수 없습니다.
⚠️ 원문 대조 메모
- 원문 개요는 회수율이 «greater than 80 %»였다고 적었지만, Table 1에서 코르티솔은 80 %로 80 %와 같습니다(표는 정수 표기라 반올림 전 값은 알 수 없습니다). 나머지 6종은 82~115 %입니다. 표 값과 맞추려면 «80 % 이상»으로 읽어야 합니다.
- 7종 중 5종(코르티코스테론 106·11-데옥시코르티코스테론 106·테스토스테론 114·17-OH 프로게스테론 115·프로게스테론 105 %)이 절대 회수율 100 %를 넘습니다. 원문은 절대 회수율 계산식, 매트릭스 효과, 반복 수를 싣지 않았고 100 % 초과의 이유도 설명하지 않습니다. 개요의 «low variation between samples»도 판단 기준이 적혀 있지 않으며, Table 1의 %CV는 6~15입니다.
- 11-데옥시코르티코스테론과 테스토스테론은 RT가 0.02분 차이입니다(컬럼피아 계산). 원문은 두 성분을 검출에서 어떻게 구분했는지 설명하지 않았고, MRM 전이도 싣지 않았습니다. RT가 붙어 있다는 것 자체는 LC-MS/MS에서 흔한 일이며 원문의 오류가 아닙니다 — 전이별 간섭 확인은 아래 실무 제언을 보십시오.
원문은 3쪽 분량으로, 1쪽에 개요·조건·Table 1, 2쪽에 Figure 1과 Analytes 표, 3쪽에 이용 약관·상표 고지가 있습니다. 원문의 그림은 Figure 1 한 장이며 이 페이지에 실었습니다. 그림 원본 해상도로 피크 모양을 보려면 원문을 확인하십시오.
Phenomenex 원문 페이지 (AN-1000)데이터 해석 및 실무 제언
- 원문은 «출발 조건»으로 읽으세요. 원문이 보여 주는 것은 7종 첨가 혈장의 절대 회수율·%CV와 대표 크로마토그램입니다. 검량 범위, 정량 한계, 정확도, 매트릭스 효과는 원문에 없으므로 정량법으로 쓰려면 이 항목들을 우리 랩에서 따로 검증해야 합니다(컬럼피아 제언).
- 용출 뒤 단계는 직접 정해야 합니다. 웰당 에틸아세테이트 1.8 mL를 받은 뒤 1 µL를 주입하기까지의 증발·재용해 조건(온도·기체·재용해 용매와 부피)이 원문에 없습니다. 재용해 용매는 초기 이동상(80 % 메탄올)과의 관계를 고려해 정하는 것이 일반적입니다(컬럼피아 해설).
- 100 % 초과 회수율은 매트릭스 효과·내부표준과 함께 보세요. 원문은 매트릭스 효과를 따로 평가하지 않았습니다. 이온화 영향과 추출 효율을 나눠 보려면 추출 전·후 첨가 비교와 성분별 동위원소 내부표준 사용을 검토하는 것이 일반적입니다(컬럼피아 제언).
- RT가 붙은 두 성분은 MRM 선택성을 확인하세요. 11-데옥시코르티코스테론(1.79분)과 테스토스테론(1.81분)은 RT 차이가 0.02분이고 그림에서도 한 피크 묶음으로 겹쳐 보이므로, 각 성분의 전이에서 서로 간섭이 없는지 우리 랩 조건으로 확인해야 합니다(컬럼피아 제언).
- 용도 범위를 지키세요. 원문은 "FOR RESEARCH USE ONLY. Not for use in clinical diagnostic procedures."로 명시합니다. 원문은 스테로이드 패널의 임상적 의미를 다루지 않으며, 이 페이지도 전처리·분석법 해설일 뿐 참고치·진단 기준은 다루지 않습니다.
결정 가이드 — 우리 랩에서 이 원문을 출발점으로 삼을까?
| 우리 랩의 상황 | 원문에서 볼 수치·한계 |
|---|---|
| 96웰로 혈장 스테로이드 여러 종을 한 번에 추출하고 싶음 | 7종 절대 회수율 80~115 %, %CV 6~15 — 로딩·용출 두 단계 프로토콜 |
| 코르티솔·코르티손이 핵심 성분 | 패널에서 가장 낮은 두 값(80 %·82 %, %CV 15·12) — 회수율·정밀도를 자체 확인 |
| 테스토스테론과 11-데옥시코르티코스테론을 함께 정량 | RT 1.81 / 1.79분으로 붙어 나옴 — 전이 간섭 확인 필요(MRM은 원문 미수록) |
| 검증된 정량법이 바로 필요함 | 검량·정량 한계·정확도·매트릭스 효과·증발 조건이 원문에 없음 — 방법 개발 출발점으로만 |
이 원문의 SLE — Novum SLE
원문이 쓴 Novum PRO MAX 96웰 플레이트(8E-S539-5GA)를 포함한 Novum SLE 제품군 정보를 제품 페이지에 정리했습니다. SLE는 전처리 소모품이며, 분석 컬럼은 Kinetex 5 µm Biphenyl입니다.
Novum SLE 보기참고 자료 및 원문
AN-1000: Steroid Panel Extraction from Plasma Using Novum PRO Simplified Liquid Extraction (SLE)
Brittany LeBlanc (Phenomenex, Inc., Torrance, CA)
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※ 위 자료들은 이 원문과 전처리 제품·시료·분석 조건이 달라, 이 페이지의 수치와 나란히 놓고 제품 간 우열을 비교할 수 없습니다.
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