국소용 크림 중 하이드로코티손 HPLC-UV - Verex 필터 바이알 여과 전후 비교
(Luna 5 µm C18(2) · 무여과 대비 흡착 손실 유무 확인 · AN-1008)
AN-1008 · Phenomenex Application Note
30초 요약
무엇을 비교했나
같은 시료(하이드로코티손 표준액, 크림 추출액)를 여과 장치 없이 주입한 것과 Verex 필터 바이알(0.45 µm, RC)로 여과해 주입한 것입니다. 시린지 필터와 견준 자료가 아닙니다
원문 결론: «similar results»
원문은 여과 시료가 무여과 시료와 비슷한 결과를 보여 멤브레인·바이알에 흡착이 없었다고 결론했고, 추출액은 하이드로코티손이 적어 확대해 보았지만 여전히 차이가 없었다고 적었습니다
근거는 크로마토그램 9개
표준액·추출액·추출액 확대 각각의 미여과·여과·겹쳐 보기입니다. 피크 면적·회수율 %·반복 횟수·시스템 적합성 수치는 원문에 없습니다
🛋️ The Interpreter: 기술 용어 쉽게 풀기
🧪 필터 바이알 (Verex Filter Vial)
시료 여과와 오토샘플러 용기를 하나로 합친 소모품입니다(제품 페이지 기준). 원문은 희석한 크림 시료 400 µL를 0.45 µm, RC 멤브레인 필터 바이알(AR0-F203-12)에 넣어 여과했다고만 적었고, 바이알의 구조·조작 방법은 이 노트에 없습니다. RC는 재생 셀룰로스(regenerated cellulose) 멤브레인의 약어로 쓰입니다(일반론). 다른 멤브레인·공경의 품번은 Phenex 시린지 필터 & Verex 필터 바이알 페이지에 있습니다.
📉 흡착 손실
분석 대상 성분이 필터 멤브레인이나 용기 표면에 붙어 실제로 주입되는 양이 줄어드는 현상입니다(일반론). 원문 서론은 부적절한 전처리 장치가 추출물(extractables) 방출, 분석 대상 결합, 시료 손실을 일으킬 수 있다고 적었고, 이 노트는 그중 «여과로 시료가 줄어드는지»를 보려고 여과·무여과 크로마토그램을 비교했습니다.
조건 요약
| 항목 | 원문 조건 (LC-UV Conditions) |
|---|---|
| 컬럼 | Luna 5 µm C18(2), 150 × 4.6 mm (Part No. 00F-4252-E0) |
| 이동상 | Methanol/Water (50:50) — 원문 표기 그대로(구배 프로그램은 원문에 없음) |
| 유속·온도 | 1 mL/min · 35 °C |
| 압력 | 284 bar (원문 «Pressure (bar): 284») |
| 검출 | UV @ 220 nm |
| 주입량 | 10 µL |
| 기기 | Agilent 1290 with DAD |
| 시료(피크) | 1. Hydrocortisone |
시료 전처리 (원문 Sample Preparation)
| 단계 | 내용 |
|---|---|
| Dissolve (용해) | 하이드로코티손 크림 1 g을 에틸아세테이트 10 mL에 |
| Dilute (희석) | 에틸아세테이트 크림 시료 2 mL + 메탄올/물(1:1) 8 mL |
| Load (적재) | 메탄올/물(1:1) 크림 시료 400 µL를 Verex Filter Vial 0.45 µm, RC (AR0-F203-12)에 |
| Inject (주입) | 최종 용출액(final eluate) 10 µL를 HPLC-UV에 |
※ 크림 제품명·하이드로코티손 표시 함량, 표준액의 농도·용매, 무여과 시료를 어떻게 바이알에 옮겼는지는 원문에 별도 수록되지 않았습니다. 조제 비율상 최종 희석액은 1 mL당 크림 약 20 mg 상당입니다(1 g/10 mL를 다시 2 → 10 mL로 5배 희석, 크림이 전량 녹고 부피가 그대로 더해진다고 가정한 컬럼피아 계산). 최종 시료 용매는 에틸아세테이트 시료 2 mL와 메탄올/물(1:1) 8 mL의 혼합액으로, 이동상(메탄올/물 50:50)과 조성이 다릅니다. Luna C18(2)는 제품군 기준 완전다공성 실리카 컬럼이며, 이 노트에는 입자 성격이 적혀 있지 않습니다.
결과 요약 — 원문 크로마토그램 9개
원문의 결과는 수치 표 없이 크로마토그램만으로 제시됩니다. 표준액에서 하이드로코티손(피크 1)은 약 11.3분에 높이 약 570~580 mAU로 나타나고, 미여과·여과 두 그림이 거의 겹칩니다(컬럼피아 판독). 크림 추출액에서는 약 3분에 2000 mAU를 넘는 큰 피크와 약 4.8분 피크가 먼저 나오고, 하이드로코티손 피크 1은 약 11분에 100 mAU 미만으로 작으며, 약 15.3분에도 피크가 하나 더 있습니다(컬럼피아 판독). 피크 1 외의 피크는 원문이 이름을 붙이지 않았습니다.
| 원문 쪽 | 시료 | 처리 | 원문 그림 제목 |
|---|---|---|---|
| 2쪽 | 표준액 | 미여과 | Hydrocortisone standard, unfiltered |
| 2쪽 | 표준액 | Verex 여과 | Hydrocortisone standard, filtered with Verex™ Filter Vials |
| 2쪽 | 표준액 | 겹쳐 보기 | Hydrocortisone standard, overlay of filtered vs. unfiltered sample |
| 3쪽 | 크림 추출액 | 미여과 | Hydrocortisone extraction, unfiltered |
| 3쪽 | 크림 추출액 | Verex 여과 | Hydrocortisone extraction, filtered with Verex™ Filter Vials |
| 3쪽 | 크림 추출액 | 겹쳐 보기 | Hydrocortisone extraction, overlay of filtered vs. unfiltered sample |
| 4쪽 | 크림 추출액(확대) | 미여과 | Hydrocortisone extraction, unfiltered, zoomed |
| 4쪽 | 크림 추출액(확대) | Verex 여과 | Hydrocortisone extraction, filtered with Verex™ Filter Vials, zoomed |
| 4쪽 | 크림 추출액(확대) | 겹쳐 보기 | Hydrocortisone extraction, overlay of filtered vs. unfiltered sample, zoomed |
※ 강조한 두 행이 아래에 실은 그림입니다. 원문에는 Figure 번호가 없어, 이 페이지는 원문 수록 순서(9개 중 3번째·9번째)를 그림 번호로 썼습니다. RT·높이는 그림 눈금에서 읽은 값이라 소수 첫째 자리 이상 정밀하지 않습니다.
Hydrocortisone standard, overlay of filtered vs. unfiltered sample
하이드로코티손 표준액의 미여과(파랑)·Verex 필터 바이알 여과(빨강) 겹쳐 보기. 피크 1의 높이와 모양이 거의 겹치며, 그림상 여과 쪽 피크가 0.1분 미만 앞에 그려져 있습니다(컬럼피아 판독 — 원문은 이 차이를 언급하지 않음). 그림 오른쪽의 App ID 글자는 지웠습니다.
Hydrocortisone extraction, overlay of filtered vs. unfiltered sample, zoomed
크림 추출액 겹쳐 보기를 세로축 약 −2~12 mAU로 확대한 그림입니다. 이 그림은 색이 반대여서 빨강이 미여과, 파랑이 여과입니다. 약 2.5·3·4.7분 피크와 피크 1(하이드로코티손), 약 15.3분 피크는 위가 잘려 있습니다(세로축 상한을 넘는 피크 5개). 6분 이후 파랑 기준선이 빨강보다 조금 위에 있고, 약 14분에 아주 작은 굴곡이 파랑에만 보입니다(아래 원문 대조 메모 참조). App ID 글자는 지웠습니다.
⚠️ 원문 대조 메모
- «흡착이 없었다»는 원문의 해석입니다. 원문 문장은 여과 시료가 «similar results»를 보였고 «This indicates there was no adsorption to the membrane nor vial»이라는 것이며, 피크 면적·높이·회수율 % 같은 수치나 반복 주입 횟수는 실려 있지 않습니다. 이 페이지도 크로마토그램 비교 이상의 정량 결론은 옮기지 않았습니다.
- 확대 겹쳐 보기(fig9)에서 6분 이후 여과 쪽 기준선이 미여과 쪽보다 약 0.1~0.2 mAU 위에 그려져 있고, 약 14분에 0.2 mAU 미만의 작은 굴곡이 여과 쪽에만 보입니다. 같은 굴곡은 개별 확대 그림(4쪽 두 번째)에도 있고 미여과 확대 그림(4쪽 첫 번째)에는 없습니다(컬럼피아 판독). 원문은 확대 그림에서도 «no difference»라고 적었고 이 굴곡을 언급하지 않았으며, 차이로 볼지 판단할 기준(잡음 수준 등)도 원문에 없습니다.
- 겹쳐 보기의 색 배정이 그림마다 다릅니다 — 2쪽은 파랑이 미여과, 3·4쪽은 빨강이 미여과입니다. 각 그림 안에서는 범례와 App ID 색(2쪽 26460 미여과·26461 여과, 3쪽 26462·26463, 4쪽 26464·26465)이 개별 그림의 App ID와 맞습니다.
이 페이지에 싣지 않은 크로마토그램 7개(표준액·추출액·추출액 확대의 미여과·여과 개별 그림, 추출액 전체 범위 겹쳐 보기)는 원문 2~4쪽에 있습니다.
Phenomenex 원문 보기 (AN-1008)데이터 해석 및 실무 제언
- 우리 랩에서는 숫자로 남기십시오. 원문은 겹쳐 보기로 판단했으므로, 필터 바이알을 도입할 때는 같은 시료의 여과·무여과 피크 면적 비를 반복 주입으로 구해 두는 것이 검증 기록에 맞습니다(컬럼피아 의견).
- 시험된 것은 RC 0.45 µm 한 가지입니다. 다른 멤브레인 재질이나 0.20 µm 공경의 결과는 이 노트에 없습니다. 재질·공경을 바꾸면 따로 확인하십시오.
- 낮은 농도에서 확인하십시오. 흡착은 붙는 양이 일정하면 농도가 낮을수록 상대 손실이 커질 수 있습니다(일반론). 원문도 추출액의 하이드로코티손이 적어 확대 그림을 따로 실었으므로, 우리 방법의 정량 하한 근처 농도에서 여과 전후를 비교하는 것이 좋습니다.
- 시료 용매와 피크 모양을 함께 보십시오. 추출액의 피크 1은 표준액 피크보다 낮고 밑폭이 넓게 그려져 있지만(컬럼피아 판독), 원문은 그 이유를 설명하지 않았습니다. 이 방법의 최종 시료에는 에틸아세테이트가 섞여 있어 이동상과 조성이 다르므로, 방법을 옮길 때는 시료 용매·주입량에 따른 피크 모양을 확인하십시오(일반론).
- 공정서 시험법 문서가 아닙니다. 원문은 이 조건을 USP·Ph. Eur. 등 공정서 방법이라고 적지 않았고 시스템 적합성 기준도 없으며, 말미에 «FOR RESEARCH USE ONLY. Not for use in clinical diagnostic procedures.»라고 적었습니다. 품질관리 시험에 쓰려면 사용자 랩의 검증이 필요합니다.
제약·제네릭 QC 분석, 허브에서 이어 보기
제약·제네릭 QC 분석 전략과 관련 자료는 의약품 QC 허브에서 이어집니다.
제약·제네릭 분석 솔루션 보기참고 자료 및 원문
AN-1008: Hydrocortisone Extraction from Topical Cream using Verex™ Filter Vials by HPLC-UV using Luna® C18(2) Columns
Brittany LeBlanc, Jenks Presley, Dr. Bryan Tackett (Phenomenex, Inc., Torrance, CA) · © 2021 Phenomenex, Inc.
🔗 관련 페이지
크림·연고 시료의 전처리와 여과를 검토하고 계신가요?
연관 기술자료
이 솔루션과 관련된 애플리케이션 노트 및 기술 문서
출처·저작권 및 상표 고지
이 페이지는 Phenomenex, Inc.가 공개한 기술 자료(AN-1008)(애플리케이션 노트·테크니컬 노트·브로셔·카탈로그 등)를 바탕으로 컬럼피아(㈜성문시스텍)가 한국 분석 실무자를 위해 번역·해설·재구성한 것입니다. 원자료의 저작권은 Phenomenex, Inc.에 있으며, 한글 해설·구성의 저작권은 ㈜성문시스텍에 있습니다. 수치와 조건은 원자료가 제시한 시험 조건에서 얻은 값이며, 개별 제품의 최종 사양은 해당 제품의 사양서를 따릅니다.
Luna®, Verex™은(는) Phenomenex, Inc.의 상표 또는 등록상표입니다. 컬럼피아는 ㈜성문시스텍이 운영하며, ㈜성문시스텍은 Phenomenex의 대한민국 공식 총판입니다.
이 페이지에 언급된 Agilent, Agilent 1290 등 타사의 회사명·제품명·장비명은 각 소유자의 상표 또는 등록상표입니다. 원자료가 기재한 시험 장비·조건이나 비교 대상을 식별하기 위한 참조 목적으로만 표기하며, 컬럼피아와 Phenomenex는 해당 회사와 제휴·후원·승인 관계에 있지 않습니다.