Generating a Calibration Curve with UHPLC Size Exclusion Column.PDF

분야: 일반자료

소개

본 문서는 이중특이 항체 Emicizumab의 집합체 분석을 위한 크로마토그래피 기법에 대해 설명한다. 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 고분자량 집합체와 크기 변형을 정량화하는 방법을 탐구하며, 특히 0.2% 미만의 작은 피크 면적에서도 효과적인 분석이 가능하다는 것을 보여준다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen™ 1.8 µm dSEC-2, 200 Å
• 차원: 300 x 4.6 mm
• 부품 번호: 00H-4787-E0
• 이동상: 200 mM 포스페이트 + 250 mM 클로라이드, pH 6.2
• 유속: 0.35 mL/min
• 주입량: 10 µL
• 온도: 25°C
• 검출기 설정: UV @ 280 nm
• 표본: Emicizumab, 10 mg/mL

핵심 기술 요소

• SEC는 크기를 기준으로 생물분자를 분리하는 기법이며, 특히 항체의 집합체를 정량화하는데 효과적이다.
• 피크 면적이 0.2% 미만인 경우에도 충분한 질량을 부하하여 정확하게 측정할 수 있다.
• 100 µg의 단백질이 필요하며, 하이브리드 칼럼 사용은 검출 효율성을 향상시킨다.

응용 분야

• 이중특이 항체 Emicizumab의 집합체 분석에 적용 가능하다.
• 다른 직교 방법을 통해 집합체가 흡착으로 인해 손실되지 않았는지 확인할 수 있다.

결론 및 권장사항

SEC를 사용한 단백질 집합체 정량화 기법은 매우 효과적이다. 특히 피크 면적이 0.2% 미만인 경우에도 충분히 측정 가능하다. 그러나 이와 같은 낮은 수준의 집합체는 흡착으로 인한 손실을 확인하기 위해 다른 직교 방법을 사용하는 것이 좋다.

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