Hyphenating Size Exclusion Chromatography to High Resolution Mass Spectrometry - IdeZ Digested Monoclonal Antibody.PDF

분야: 바이오제약

소개

본 문서는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)와 고분리능 질량 분석법(HRMS)을 결합하여 IdeZ 소화된 단일클론 항체를 분석하는 방법에 대해 설명합니다. SEC는 용액 내에서 생물분자의 크기에 따라 분리하는 기술로, 특히 사이즈 변이체와 고분자 중합체의 정량화에 유용하며, HRMS와 결합하여 바이오 물질을 특성화하는데 사용됩니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen™ 1.8 µm dSEC-2, 200 Å
• 차원: 150 x 2.1 mm
• 제품 번호: 00F-4787-AN
• 이동상: 100 mM Ammonium Acetate
• 유속: 90 µL/min
• 주입량: 2.5 µL
• 온도: 25 °C
• 검출기 설정: HRMS
• 시료: Trastuzumab, IdeZ digested, 10 mg/mL

핵심 기술 요소

• SEC와 HRMS의 결합을 통해 단일클론 항체(mAb)의 사이즈 변이체 및 고분자 중합체를 정량화할 수 있다.
• IdeZ는 IgG의 힌지 영역 아래에서 절단하여 Fab'2와 두 개의 Fc/2 프래그먼트를 생성한다. 이를 통해 하이퍼바리어 영역에 특정된 후생성 변형(PTMs)을 구체적으로 식별할 수 있다.
• Fab'2 및 Fc/2 프래그먼트 간의 우수한 크로마토그래피 분리를 달성하여 각각의 프래그먼트에 대한 데이터 해석이 용이하다.

응용 분야

• 바이오제약 산업에서 단일클론 항체(mAb)의 사이즈 변이체 및 고분자 중합체를 정량화하는 데 사용된다.
• 후생성 변형(PTMs), 특히 당단백질(glycosylation)을 식별하는데 유용하다.

결론 및 권장사항

SEC-HRMS는 단일클론 항체의 사이즈 변이체와 고분자 중합체를 정량화하고, 후생성 변형(PTMs), 특히 당단백질(glycosylation)을 식별하는 데 강력한 기술이다. 이 방법은 작은 mAb 포맷에도 적용 가능하며, 향후 다양한 바이오 물질의 특성 분석에 활용될 수 있다.

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