발사르탄·사쿠비트릴 복합제 키랄 이성질체 동시 분리
두 원료의 광학 순도를 한 컬럼·한 방법으로
TN-1402 · Phenomenex Technical Note
30초 요약
이성질체 4종 + 원료 2종
발사르탄 R-이성질체(RC-A)와 사쿠비트릴 거울상·2S,4S·2R,4R 이성질체를 두 원료와 함께 60분 한 번에 분리
역상 조건의 키랄 분리
헥산이 아니라 0.1 % 포름산 물 / 아세토니트릴·메탄올 그라디언트. 이성질체 분리도 2.1~5.4
0.5 % 수준 재현성
이성질체 0.5 % 첨가 용액 6회 주입, 면적 %RSD 0.3~1.0. 공정서 방법이 아닌 제조사 개발 방법입니다
🛋️ The Interpreter: 기술 용어 쉽게 풀기
🪞 거울상 vs 부분입체이성질체
원문에 따르면 발사르탄은 거울상 두 개(S-체가 발사르탄, R-체가 Related Compound-A), 사쿠비트릴은 키랄 중심이 두 개라 거울상 1종(2S,4R)과 부분입체이성질체 2종(2R,4R · 2S,4S)을 가집니다. 거울상은 키랄 고정상이 있어야 갈리고, 부분입체이성질체는 물성이 달라 원리상 비키랄 조건에서도 갈릴 수 있습니다. 다만 이 노트에서 2S,4S-이성질체는 사쿠비트릴 바로 뒤에 분리도 2.1로 붙어 나옵니다.
💧 역상 키랄 모드
다당류 기반 키랄 컬럼은 헥산 계열 정상상으로 쓰는 경우가 많지만, 이 노트는 Lux 5 µm Cellulose-3(완전다공성)에 물·아세토니트릴·메탄올 이동상을 썼습니다. 희석액도 물·메탄올(20:80)이고, 두 원료와 이성질체를 UV 254 nm 한 파장으로 함께 검출합니다.
조건 요약
| 항목 | TN-1402 조건 |
|---|---|
| 컬럼 | Lux 5 µm Cellulose-3, 250 × 4.6 mm (00G-4493-E0) |
| 이동상 | A: 0.1 % Formic Acid in Milli-Q water / B: 0.1 % Formic Acid in Acetonitrile / Methanol (425:575, v/v) |
| 그라디언트 (%B) | 0분 42 → 15분 42 → 45분 80 → 50분 80 → 52분 42 → 60분 42 |
| 유속 · 주입 | 1.0 mL/min · 5 µL |
| 온도 | 컬럼 오븐 40 °C · 오토샘플러 10 °C |
| 검출 · 기기 | UV 254 nm · Waters Arc HPLC with PDA |
| 희석액 | Water / Methanol (20:80, v/v) |
| 용액 | 시험 용액: 발사르탄 1.0 mg/mL + 사쿠비트릴 0.5 mg/mL · Spike: 이성질체 4종 각 0.5 % 첨가 · 개별 표준액: 각 0.1 mg/mL |
※ 원문 조건표의 온도 칸은 줄이 어긋나 있어 "Column Oven Temperature 40 °C, Auto Sampler Temperature 10 °C"로 읽었습니다. 시스템 적합성 판정 기준(합격선)은 원문에 별도 수록되지 않았습니다.
주요 결과 (원문 Figure 2·3 표에서 발췌)
| 피크 | 머무름 시간 (분) | % Area | USP 분리도 | USP Tailing | 면적 %RSD (N=6) |
|---|---|---|---|---|---|
| Valsartan | 10.888 | 54.85 | — | 1.3 | 0.4 |
| Valsartan Related Compound-A | 13.315 | 0.46 | 2.3 | 1.2 | 0.9 |
| Sacubitril | 32.743 | 42.76 | 21.8 | 1.2 | 0.3 |
| Sacubitril-2S,4S-Isomer | 33.974 | 0.70 | 2.1 | 1.1 | 0.5 |
| Sacubitril enantiomer | 35.214 | 0.57 | 2.1 | 1.3 | 1.0 |
| Sacubitril-2R,4R-Isomer | 38.543 | 0.66 | 5.4 | 1.1 | 0.8 |
※ 제조사(Phenomenex) 기술노트의 값이며 컬럼피아가 재현한 값이 아닙니다. 머무름 시간·% Area·분리도·Tailing은 Figure 2(Spike Solution 1회), %RSD는 Figure 3(6회)입니다. 원문 본문은 분리도를 ">2.1"로 요약하지만 표의 최솟값은 2.1이며, 사쿠비트릴 거울상의 %RSD는 표의 Std. Dev(960)/평균 면적(87390)으로 다시 계산하면 약 1.1 %입니다.
Figure 2. Chromatogram of Valsartan and Sacubitril sample spiked with impurities (Spike Solution)
이성질체 4종을 0.5 %씩 첨가한 시험 용액(검정)과 블랭크(빨강)의 겹침입니다. 발사르탄 10.888분 뒤에 Related Compound-A(13.315분), 사쿠비트릴 32.743분 뒤에 2S,4S-이성질체·거울상·2R,4R-이성질체가 차례로 용리됩니다.
Figure 3. Overlayed chromatogram of six replicate injections of the Valsartan and Sacubitril complex (Spike Solution)
Spike Solution 6회 주입 겹침과 면적 %RSD 표입니다. 가장 큰 값은 사쿠비트릴 거울상의 1.0입니다.
이 페이지에 싣지 않은 Figure 1(발사르탄·사쿠비트릴 구조)와 Figure 4(개별 표준액 겹침 크로마토그램), 표준품 목록은 원문에 있습니다.
※ Figure 4 표의 면적 값은 첨가 농도와 비례 관계가 맞지 않아 이 페이지에 옮기지 않았습니다. 피크 확인용 머무름 시간(발사르탄 10.886분 등)은 Figure 2와 거의 같습니다.
TN-1402 원문 보기데이터 해석 및 실무 제언
- 관리 포인트는 사쿠비트릴 바로 뒤 두 피크입니다. 2S,4S-이성질체(33.974분)와 거울상(35.214분)이 주성분 직후에 붙어 나오며 분리도가 모두 2.1입니다. 발사르탄 쪽 RC-A(2.3)나 2R,4R(5.4)보다 여유가 작으므로, 컬럼 이력이 쌓이면 이 두 값부터 추적하십시오.
- 재현성의 약한 고리도 같은 피크입니다. 면적 %RSD가 가장 큰 것은 사쿠비트릴 거울상(표 1.0, 재계산 약 1.1)입니다. 주성분 직후에 나오는 작은 피크라 적분 기준선 설정에 민감할 수 있습니다.
- 블랭크 겹침을 함께 보세요. Figure 2의 블랭크는 그라디언트가 올라가는 구간에서 기준선이 떠오릅니다. 45분 이후 영역에는 목적 피크가 없지만, 방법을 옮길 때는 블랭크를 같은 배율로 겹쳐 간섭 여부를 확인하는 편이 안전합니다.
- 공정서 시험이 아닌 개발 방법입니다. 원문은 판정 기준 없이 분리·재현성 결과를 제시합니다. 복합제 광학 순도 시험으로 쓰려면 우리 랩에서 특이성·정량한계·직선성 등 밸리데이션을 별도로 수행해야 합니다.
복합제·광학 순도 분석 사례를 더 보려면
정량·유연물질·키랄 순도 시험의 컬럼 선택 사례를 제약·제네릭 분석 솔루션에 모았습니다.
제약·제네릭 분석 솔루션 보기참고 자료 및 원문
TN-1402: Chiral Separation of Valsartan and Sacubitril Enantiomers on Lux 5 µm Cellulose-3 Column
Trivikram Reddy Gundala, PhD, Rajesh Babu Dandamudi, PhD (Phenomenex India); Sean Orlowicz (Phenomenex Inc., Torrance, CA)
복합제 광학 순도 방법을 세우고 계신가요?
연관 기술자료
이 솔루션과 관련된 애플리케이션 노트 및 기술 문서
출처·저작권 및 상표 고지
이 페이지는 Phenomenex, Inc.가 공개한 기술 자료(TN-1402)(애플리케이션 노트·테크니컬 노트·브로셔·카탈로그 등)를 바탕으로 컬럼피아(㈜성문시스텍)가 한국 분석 실무자를 위해 번역·해설·재구성한 것입니다. 원자료의 저작권은 Phenomenex, Inc.에 있으며, 한글 해설·구성의 저작권은 ㈜성문시스텍에 있습니다. 수치와 조건은 원자료가 제시한 시험 조건에서 얻은 값이며, 개별 제품의 최종 사양은 해당 제품의 사양서를 따릅니다.
이 페이지에 표시된 Phenomenex 브랜드·제품명은 Phenomenex, Inc.의 상표 또는 등록상표입니다. 컬럼피아는 ㈜성문시스텍이 운영하며, ㈜성문시스텍은 Phenomenex의 대한민국 공식 총판입니다.
이 페이지에 언급된 Waters, Arc HPLC, Milli-Q 등 타사의 회사명·제품명·장비명은 각 소유자의 상표 또는 등록상표입니다. 원자료가 기재한 시험 장비·조건이나 비교 대상을 식별하기 위한 참조 목적으로만 표기하며, 컬럼피아와 Phenomenex는 해당 회사와 제휴·후원·승인 관계에 있지 않습니다.