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Automated Method Development of Oligonucleotide in Tissues Using Clarity OTX 96 Well Plate and High Resolution Mass Spectrometry (TN-0097)

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 합성 올리고뉴클레오티드(oligo) 치료제의 개발 과정에서 필요로 하는 TK 및 PK/PD 연구를 자동화된 방법으로 수행하기 위한 기술을 설명합니다. LC/MS/MS 방법은 높은 특이성과 민감도, 그리고 짧은 메소드 개발 시간 때문에 엮인 결합 시험 또는 ELISA보다 선호됩니다. 그러나 분석 전에 올리고뉴클레오티드를 청정하게 추출하는 것이 어렵기 때문에 자동화된 고해상도 질량분석법을 사용한 조직에서의 올리고뉴클레오티드 분리를 위한 새로운 방법론이 제시됩니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

컬럼: Clarity ® Oligo-XT
- 차원: 50 x 2.1 mm
- Part No.: 00B-4745-AN
이동상:
- A: 1.0 % HFIP & 0.1 % DIEA with 10 µM EDTA in Methanol
- B: 1.0 % HFIP & 0.1 % DIEA with 10 µM EDTA in Methanol Water (50:50 v/v)
그라디언트:
- 시간(min): 0.5, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 5.0
- % B: 30, 60, 100, 100, 30, 30
유속: 500 µL/min
주입량: 10 µL
온도: 40 °C
검출기 설정:
- Thermo Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer, HESI, 음극 극성

핵심 기술 요소

자동화된 고정상 추출(SPE) 방법을 사용하여 조직에서 올리고뉴클레오티드를 청정하게 추출합니다.
Clarity OTX 96-웰 플레이트와 Tecan Freedom EVO® 시스템을 통한 자동화된 실험 설계는 높은 회수율과 효율적인 분석을 제공합니다.
다양한 세정 용매(W1-W4) 및 엘루션 용매(E1-E4)를 사용하여 최적의 추출 조건을 찾습니다.

응용 분야

TK/PK/PD 연구: 합성 올리고뉴클레오티드 치료제 개발 과정에서 TK 및 PK/PD 연구에 활용됩니다.
조직 샘플 분석: 미니 돼지 간, 신장 조직 등 다양한 생물학적 매트릭스에서의 올리고뉴클레오티드 추출과 분석.

결론 및 권장사항

Clarity OTX 96-웰 플레이트와 Tecan Freedom EVO® 시스템을 사용한 자동화된 실험 설계는 복잡한 생물학적 샘플에서 올리고뉴클레오티드를 청정하게 추출하고 회수율이 70% 이상인 방법론을 제공합니다. 이 기술은 높은 효율성과 정확성을 통해 신약 개발 과정에 중요한 도구가 될 것입니다.

참고사항

Clarity OTX Starter Kit: 개념 검증 또는 소규모 샘플 추출에 적합.
개별 Clarity OTX 96-웰 플레이트 및 Lysis-Loading Buffer: 대량의 샘플 처리와 로봇 시스템과의 호환성을 위해 권장.

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