High-Resolution LC-MS Characterization of Antibody Drug Conjugates with PNGase F Enzymatic Cleavage of N-linked Oligosaccharides using Biozen™ Native-RP-5.PDF

분야: 바이오제약

소개

항체-약물 콘jugate (ADC)는 종양 세포를 표적으로 하여 건강한 세포에 피해 없이 파괴하는 데 성공하여 여전히 활발하게 연구되고 있는 바이오제약 모달리티입니다. 시스테인 연결 ADC는 개선된 약동학, 효능 및 독성 감소를 제공합니다. 본 기술 노트에서는 bioZen™ Native-RP-5 컬럼을 사용하여 PNGase F로 N-연결 당단백질을 분해한 후의 고분리능 LC-MS 캐릭터라이제이션 방법을 설명합니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen Native-RP-5
  • 차원: 50 x 2.1 mm
  • Part No.: 00B-4800-AN
• 이동상:
  • A: Water에 50 mM Ammonium Acetate
  • B: Isopropanol/Water (v/v) 50/50 혼합물에 25 mM Ammonium Acetate
• 유속: 0.2 mL/min
• 주입량: 20 µg ADC on-컬럼
• 온도: 30 °C
• LC System: Agilent 1290 Infinity II UHPLC (G7120A 고속 이원 펌프, G7167B 멀티샘플러, G7116B 멀티컬럼 컬럼 조절기, G7117B 다이오드 어레이 검출기)
• 검출기: SCIEX® X500B HRMS 및 Agilent® DAD (UV)

핵심 기술 요소

• bioZen™ Native-RP-5 컬럼은 역상 조건에서 바이오타입의 원래 형태를 유지하도록 설계되었습니다.
• PNGase F로 N-연결 당단백질을 분해하여 ADC의 전체 질량 측정 및 약물 대 항체 비율 (DAR) 종류의 분리를 수행합니다.

응용 분야

• 시스테인 연결 ADC의 고분리능 LC-MS 캐릭터라이제이션.
• Adcetris®, Padcev®, Polivy® 및 Tivdak®와 같은 상업적 ADC 약물에 대한 연구.

결론 및 권장사항

bioZen™ Native-RP-5 컬럼은 N-연결 당단백질의 성공적인 분해를 통해 더 간단한 질량 지문을 제공하고, 전체 ADC의 LC HRMS 분석에서 약물 대 항체 비율 (DAR) 측정에 적합합니다. 이 기술은 앞으로도 ADC 연구 및 개발에 중요한 도구가 될 것입니다.

주요 결과

• PNGase F 처리된 ADC 샘플에서는 N-연결 당단백질과 관련된 질량 손실이 관찰되었습니다.
  • Adcetris®: 약 3030.3 Da의 질량 손실 (G0F/G1F)
  • Padcev®, Polivy®, Tivdak®: 각각 약 2875-2890.7 Da의 질량 손실 (G0F/G0F)

이 결과는 N-연결 당단백질이 성공적으로 분해되었음을 확인합니다.

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