Impact of Mobile Phase Conditions and Temperature on Antibody Drug Conjugates Separation using Biozen Native RP-5 Column Juan M. Perfetti, Miklos Czaun, Jame.PDF

분야: 시료전처리

소개

항체-약물 콘jugate (ADC)는 항원을 표적으로 하는 항체의 특이성을 활용하여 세포독성 물질을 몸에서 원하는 위치에 직접 전달하는 새로운 바이오 치료법입니다. 이 연구에서는 bioZen Native RP-5 HPLC 컬럼을 사용한 ADC 분리에서 이동상 조건과 온도의 영향을 탐구하였습니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen Native-RP-5, 50 x 2.1 mm
• 이동상:
  • 고 이온 강도: A) 50 mM Ammonium Acetate in Water (pH ~6.8), B) Isopropanol/50mM Ammonium Acetate in Water (50/50, v/v)
  • 저 이온 강도: A) 20 mM Ammonium Acetate in Water (pH ~6.8), B) Isopropanol/40mM Ammonium Acetate in Water (72/25, v/v)
• 유속: 0.2 mL/min
• 주입량: 20 µg ADC on-컬럼
• 온도: 30-40 °C
• LC 시스템: Agilent 1290 Infinity II UHPLC
• 검출기 설정:
  • HRMS: SCIEX X500B, ESI 모드, Positive polarity, Source Temperature: 450 °C, Declustering Potential: 200 V (50 V spread), CE ± CE Spread: 5 ± 0V, Ion Spray Voltage: 5000 V
  • UV: Agilent DAD (UV) at 280 nm

핵심 기술 요소

• 이동상의 이온 강도를 낮추면 모든 DAR 종류의 머무름 시간이 증가하고, MS 신호 강도는 향상됩니다.
• pH를 낮춤으로써Retention time은 감소하지만 peak width는 증가합니다. 또한 추가적인 positional isomers 또는 단백질의 다른 구조체들이 분리될 수 있습니다.
• 컬럼 온도를 높이면 모든 DAR 종류의 retention time이 줄어들지만, 일부 DAR 종류에 대한 추가 피크가 분리됩니다.

응용 분야

• ADCs의 고속 및 포괄적인 특성화를 위한 새로운 HPLC 기술 개발.
• 온도와 이동상 조건을 변경하여 다양한 positional isomers 또는 단백질 구조체를 분석할 수 있습니다.

결론 및 권장사항

이 연구는 bioZen Native RP-5 컬럼의 성능에 영향을 미치는 요인들을 보여주며, 이온 강도와 pH 조건, 온도 변화가 ADCs의 retention time과 peak width에 어떻게 영향을 주는지 분석하였습니다. 이러한 결과를 바탕으로 최적의 분리 조건을 설정할 수 있으며, 이를 통해 ADCs의 더 포괄적인 특성화 시간이 크게 단축됩니다.

참고사항

• 이동상의 이온 강도와 pH 변화에 따른 retention time과 peak width의 변화는 단백질 구조체의 변형 또는 위치 isomers를 분리하는 데 유용합니다.
• 온도 증가로 인해 추가적인 피크들이 분리되며, 이를 통해 다양한 positional isomers나 단백질의 다른 구조체들을 확인할 수 있습니다.

이 요약은 원문 문서를 기반으로 자동 생성되었습니다.