Quantitation of Neutral and Sialylated Glycans using Biozen HILIC Chromatography and Solid Phase Extraction (TN-0133).PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 바이오제약 분야에서 중성 및 시알레이트된 당단백질의 정량화 방법을 다룹니다. 특히, bioZen™ HILIC 크로마토그래피와 고정상 추출법(SPE)를 사용하여 복잡한 당단백질의 당 첨가물 패턴을 분석하는 데 초점을 맞춥니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 2.6 µm Glycan, 150 x 2.1 mm, Part No.: 00F-4773-AN
• 이동상:
  • A: 250 mM 아미노 포르메이트 (pH 4.5)
  • B: 에탄올
• 유속: | 시간 (min) | %B | 유속 (mL/min) | |--------------|------|---------------| | 0 | 70 | 0.4 | | 38 | 50 | 0.4 | | 41.5 | 0 | 0.2 | | 44.5 | 0 | 0.2 | | 48.1 | 70 | 0.2 | | 52.6 | 70 | 0.4 | | 60 | 70 | 0.4 |
• 컬럼: 60 °C
• LC 시스템: bioZen Glycan UHPLC

핵심 기술 요소

• 중성 이중 가지 당단백질과 시알레이트된 당단백질의 분리 및 정량화를 위한 HILIC 크로마토그래피 방법 개발.
• PNGase F 소화 후 N-당단백질 라벨링을 통한 표본 준비 과정 최적화.
• bioZen™ N-Glycan Clean-Up Microelution 플레이트 사용으로 표본 손실 감소 및 분석의 민감도 향상.

응용 분야

• 복잡하고 고농축된 시알레이트 당단백질의 정량화.
• 다양한 항체와 당단백질에 대한 당 첨가물 패턴 분석.

결론 및 권장사항

bioZen™ N-Glycan Clean-Up과 bioZen Glycan UHPLC 컬럼은 형광 라벨링된 N-당단백질의 분석을 효과적으로 수행하며, 특히 시알레이트 당단백질에 대한 표본 정제와 HPLC 분석이 어렵지만 성공적입니다. 향후 연구에서는 다양한 당 첨가물 패턴과 복잡한 당 단백질 구조를 더 잘 이해하기 위한 추가적인 방법 개발을 권장합니다.

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