N-Glycan Analysis.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 mAbs에서 흔히 발견되는 fucosylated, 중성 biantennary glycans에 대한 분석 방법을 다룹니다. 특히 Human IgG 라이브러리의 glycosylation 패턴과 비교하여 간단한 glycan 프로파일을 모니터링하는 방법에 초점을 맞춥니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 2.6 µm Glycan, Dimensions: 100 x 2.1 mm
• 이동상:
  • A: 100 mM Ammonium Formate, pH 4.5
  • B: Acetonitrile
• 그라디언트:
  • Time (min): 0, %B: 76; 16, %B: 72; 25.9, %B: 40; 27.2, %B: 40; 27.3, %B: 76; 30, %B: 76
• 유속: As noted (기재된 대로)
• 온도: 50 °C
• 검출기 설정: FLD ex/em 330/420 nm

핵심 기술 요소

• mAbs의 glycosylation 프로파일은 효능, 청산율 및 면역원성에 큰 영향을 미친다.
• Man-5와 G0과 같은 high mannose 종류를 분리하는 것이 중요하며, 이는 고정상 선택에도 크게 의존한다.
• sialylated glycans의 경우 HILIC 기술이 적절한 selectivity를 제공하지 않을 수 있으므로 mixed-mode anion-exchange 컬럼이나 DMB 라벨링을 사용해야 할 수도 있다.

응용 분야

• mAbs 및 Fc-fusion proteins에서 glycosylation 패턴의 모니터링.
• sialylated glycans는 항체 의존성 세포 독성을 포함한 다양한 생물학적 효과에 영향을 미친다.

결론 및 권장사항

mAb의 glycan 분석은 고정상 선택과 그라디언트 최적화를 통해 수행되어야 하며, 특히 high mannose 종류와 afucosylated glycans 사이의 분리능이 중요하다. sialylated glycans에 대한 정확한 분리를 위해서는 HILIC 기술 외에도 mixed-mode anion-exchange 컬럼이나 DMB 라벨링을 고려해야 한다.

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