Effect of Temperature on Reversed Phase Separations of Monoclonal Antibodies Using bioZen WidePore C4.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 바이오제약 분야에서 monoclonal antibodies(mAbs)의 정체성 분석을 위해 역상 HPLC를 사용한 온도 최적화에 대해 설명하고 있다. 특히, 컬럼처리 조건 변화가 단백질의 이차 및 삼차 구조에 미치는 영향과 이를 통해 얻어지는 피크 형태와 선택성을 개선하는 방법을 다루고 있다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 2.6 µm WidePore C4, Dimensions: 100 x 2.1 mm
• 이동상 A: Water with 0.1 % TFA
• 이동상 B: Acetonitrile with 0.1 % TFA
• 경사도 (Gradient):
  • Figure 1, 2: 20-55% B in 6 minutes
  • Figure 3, 4: 25-45% B in 6 minutes
• 유속: 0.5 mL/min
• 검출기 설정:
  • Figure 1, 2: 280 nm
  • Figure 3, 4: 214 nm
• 온도: 실험에 따라 70 °C, 80 °C, 90 °C로 조정됨.
• 샘플: Infliximab (1 mg/mL), NIST mAb (1 mg/mL)

핵심 기술 요소

• 온도 변화가 단백질의 이차 및 삼차 구조에 영향을 미쳐 피크 형태와 선택성을 개선할 수 있음.
• 80 °C에서 가장 우수한 피크 형태를 보임. 하지만, 90 °C에서는 일부 변이체의 부분 분리로 인해 피크 폭이 증가함.
• 하중 연쇄 (light chain)와 중하중 연쇄 (heavy chain)에 대한 불순물 프로파일은 온도 변화에 따라 달라짐.

응용 분야

• mAbs의 정체성 분석을 위한 LC-UV 불순물 분석.
• LC-MS를 이용한 단백질 치료제의 기본 시퀀스 확인.

결론 및 권장사항

온도 변화는 큰 분자 역상 HPLC 방법에서 피크 형태 개선에 기여할 수 있지만, 온도 증가로 인해 선택성이 저하될 수도 있음을 주목해야 한다. 따라서 온도 조절은 실험 설계의 일부로서 신중하게 고려되어야 하며, 각 불순물 특성에 따라 적합한 온도를 선택하는 것이 중요하다.

온도 변화가 단백질 구조와 분리능에 미치는 영향을 이해하고 이를 통해 최적화된 조건을 찾는 것은 mAbs의 정확한 분석과 품질 관리를 위한 중요한 요소이다.

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