올라파립 USP·Ph. Eur.(초안) 함량·유연물질 시험법 현대화
USP L1(3.5 µm) 방법과 Ph. Eur. 초안 모노그래프 방법을 Gemini 3 µm NX-C18(완전다공성)과 Kinetex 2.6 µm EVO C18(코어셀)로 — 각 공정서 허용 조정 범위 안에서
TN-1447(USP) · TN-1448(Ph. Eur. 초안 모노그래프) · Phenomenex Technical Note (Phenomenex India Phenologix Lab 외) — 서로 다른 두 문서입니다
30초 요약
두 대안 컬럼 모두 L/dp 범위 안
모노그래프 L1(100 × 4.6 mm, 3.5 µm)의 L/dp 28.57 대비 Gemini 33.33(+16.67%), Kinetex 38.46(+34.62%) — USP 허용 범위 −25% ~ +50% 안의 조정입니다
Kinetex, Gemini 대비 머무름 약 25% 단축
함량 시험 올라파립 피크 Gemini 20.596분 · Kinetex 15.538분. 구배 프로그램은 USP 원본 41분 · Gemini 35.14분 · Kinetex 30.46분
USP 시스템 적합성 5항목 — 두 컬럼 모두 충족
Kinetex 기준 테일링 1.11 · 함량 RSD 0.09% · 분리도 3.21/4.55 · 유연물질 RSD 1.81% · S/N 24.70 (Gemini 값은 아래 표)
Ph. Eur. 초안(draft) 모노그래프 판 — TN-1448: 같은 두 컬럼으로 Ph. Eur. 초안 모노그래프 방법을 수행한 별도 기술노트입니다. TN-1448이 수치로 적은 기준인 분리도 ≥ 1.5(불순물 A–올라파립, 올라파립–불순물 B)를 Gemini 3.44·5.96, Kinetex 3.23·4.55로 충족했습니다. Ph. Eur. 판 섹션으로 이동
공식 데이터 vs 컬럼피아 실무 인사이트
제조사 공식 Spec
- USP 모노그래프 컬럼: L1, 100 × 4.6 mm, 3.5 µm
- 대안 컬럼 ①: Gemini 3 µm NX-C18, 100 × 4.6 mm (00D-4453-E0) — 완전다공성
- 대안 컬럼 ②: Kinetex 2.6 µm EVO C18, 100 × 3 mm (00D-4725-Y0) — 코어셀(superficially porous)
- 이동상 메탄올/물 + TFA, 50 °C, UV 276 nm, Waters Arc HPLC (PDA) — 두 컬럼 모두 모노그래프 요건 충족
컬럼피아 실무 인사이트
- Kinetex 조건의 핵심은 내경 4.6 → 3 mm입니다. 유속이 1.15 mL/min(USP 원본 2, Gemini 2.33)으로 줄어 런당 이동상 소비가 USP 원본·Gemini 조건 대비 약 57% 감소(원문 수치로 컬럼피아가 계산한 값)
- L/dp는 원본 28.57보다 높은 38.46(+34.62%)으로 허용 상한 +50% 안입니다. 다만 실측 분리도는 Gemini보다 낮았습니다(Gemini 3.46/6.02, Kinetex 3.21/4.55) — 기준 1.5는 충족하므로 아래 표에서 여유를 확인하십시오
- 유연물질 표준액 RSD는 Gemini 3.8%, Kinetex 1.81% (기준 NMT 5.0%). 저농도 피크 재현성은 Kinetex 쪽 여유가 더 컸습니다
🛋️ The Interpreter: 기술 용어 쉽게 풀기
📏 L/dp란?
컬럼 길이(L)를 입자 크기(dp)로 나눈 값으로, 그 컬럼이 낼 수 있는 분리 능력의 대략적인 크기를 나타냅니다. 모노그래프 L1은 100 mm ÷ 3.5 µm = 28.57. USP 허용 조정은 이 값을 그대로 두거나 원래 값의 −25% ~ +50% 사이에서 바꾸는 것을 허용합니다. 길이는 그대로 100 mm에 입자만 2.6 µm로 줄이면 L/dp는 38.46으로 올라갑니다. 같은 길이의 자에 눈금을 더 촘촘히 새긴 셈입니다.
🥚 코어셀 vs 완전다공성
완전다공성(Gemini NX-C18)은 입자 전체가 구멍 투성이인 스펀지이고, 코어셀(Kinetex EVO C18, 원문 표기 superficially porous)은 단단한 속심 위에 얇은 다공층만 입힌 입자입니다. 분석물이 입자 안으로 들어갔다 나오는 길이가 짧아져 피크가 덜 퍼집니다. 원문은 이 두 성격의 컬럼을 같은 USP 방법에 나란히 적용해 둘 다 요건을 충족함을 보였습니다.
⏱️ 구배 시간은 왜 바뀌나?
USP 허용 조정은 각 구배 구간의 시간을 구배 부피 ÷ 컬럼 부피(L × dc²로 표현) 비가 일정하도록 바꾸라고 합니다. 컬럼이 가늘어지고(4.6 → 3 mm) 유속이 바뀌면, 같은 "컬럼 몇 개 분량의 용매가 흐르는 동안 몇 %B까지 올린다"를 지키기 위해 시간축을 다시 맞추는 것입니다. 그래서 USP 원본의 35분 구간이 Gemini에서는 30분, Kinetex에서는 26분이 됩니다.
실험 조건 및 데이터
USP 원본(L1) vs 두 대안 컬럼 조건 — 한 장 비교
| 파라미터 | USP 허용 조정 (원문 Allowable change) | USP 원본 (L1) | Gemini NX-C18 | Kinetex EVO C18 |
|---|---|---|---|---|
| 컬럼 / 입자 구조 | — | L1 | Gemini 3 µm NX-C18 완전다공성 · 00D-4453-E0 | Kinetex 2.6 µm EVO C18 코어셀 · 00D-4725-Y0 |
| 길이 L (mm) | Not specified | 100 | 100 | 100 |
| 내경 dc (mm) | Not specified | 4.6 | 4.6 | 3 |
| 입자 dp (µm) | Not specified | 3.5 | 3 | 2.6 |
| L/dp | 일정하게 유지하거나 규정 비의 −25% ~ +50% 사이 | 28.57 | 33.33 (+16.67%) | 38.46 (+34.62%) |
| 유속 F (mL/min) | 치수 변경 시 선속도 유지 조정 허용, 추가로 ±50% 변경 허용 | 2 | 2.33 | 1.15 |
| 구배 시간 (분) %B: 0 → 55 → 90 → 90 → 0 → 0 | 구간별 시간을 구배 부피 : 컬럼 부피(L × dc²) 비가 일정하도록 조정 | 0 · 35 · 37 · 38 · 38.1 · 41 | 0 · 30 · 31.71 · 32.57 · 32.66 · 35.14 | 0 · 26 · 27.49 · 28.23 · 28.3 · 30.46 |
| 주입량 (µL) | 감량은 어느 정도든 허용 | 10 | 10 | 4.3 |
| 컬럼 온도 | ± 10 °C | 50 °C | 50 °C | 50 °C |
| 검출 파장 | 변경 불가(None) | 276 nm | 276 nm | 276 nm |
| 이동상 pH · 조성 · 완충액 농도 | pH ±0.2 · 소량 성분 상대 ±30%(절대 ±10% 이내) · 완충액 ±10% | 해당 없음(NA) — 세 조건 모두 동일 이동상 | ||
※ 허용 조정 문구와 수치는 원문 표를 옮긴 것입니다(원문은 "USP allowable adjustments"로 표기, 해당 일반 장은 USP <621>). 원문 본문은 이 표를 "Table 1"로 참조하지만 표 자체에는 번호가 붙어 있지 않습니다. USP 원본 열은 모노그래프 방법의 값이며, 원문은 L1 컬럼으로 직접 측정한 크로마토그램은 싣지 않았습니다. 공통 조건 — 이동상 A: 메탄올/물(5:95), B: 메탄올/물(95:5), 각 용액 1 L당 트리플루오로아세트산 0.6 mL 첨가 · 희석액 메탄올/물(50:50) · 장비 Waters Arc HPLC (PDA) · 검출 UV 276 nm. 용액 조제는 모두 USP 모노그래프를 따랐다고만 적혀 있고, 구체적인 농도는 원문에 별도 수록되지 않았습니다.
원문 표기 확인이 필요한 지점 — LC 조건 상자의 유속·주입량
원문 1쪽의 LC Conditions 상자에는 두 컬럼 공통으로 Flow Rate 2 mL/min · Injection Volume 10 µL로 적혀 있습니다. 그러나 같은 쪽의 조정 비교표는 Gemini NX-C18 2.33 mL/min, Kinetex EVO C18 1.15 mL/min · 4.3 µL를 제시하고, 구배 시간도 이 유속에 맞춰 환산되어 있습니다. 상자의 값은 USP 원본 조건과 일치하므로, 이 페이지는 조정 비교표의 값을 각 컬럼 조건으로 옮겼습니다. 자사 검증 시 이 두 값을 혼동하지 마시기 바랍니다.
시스템 적합성 기준 vs 두 컬럼의 결과
| 시험 · 항목 | USP 기준 | Gemini NX-C18 | Kinetex EVO C18 |
|---|---|---|---|
| 함량 · 테일링 (표준액) | NMT 2.0 | 0.99 (Fig. 2) | 1.11 (Fig. 8) |
| 함량 · 면적 RSD (표준액, N=6) | NMT 0.73% | 0.04% (Fig. 3) | 0.09% (Fig. 9) |
| 유연물질 · 분리도 RC-A / 올라파립 | NLT 1.5 | 3.46 (Fig. 4) | 3.21 (Fig. 10) |
| 유연물질 · 분리도 올라파립 / RC-B | NLT 1.5 | 6.02 (Fig. 4) | 4.55 (Fig. 10) |
| 유연물질 · 면적 RSD (표준액, N=6) | NMT 5.0% | 3.8% (Fig. 7) | 1.81% (Fig. 13) |
| 유연물질 · S/N (감도 용액) | NLT 10 | 17.57 (Fig. 5) | 24.70 (Fig. 11) |
| 올라파립 머무름 (함량 표준액) | — | 20.596분 | 15.538분 |
※ 모든 값은 원문 각 Figure 아래 결과표에서 옮겼습니다. 원문에서 Figure 5·11·13은 크로마토그램과 결과표는 있으나 그림 제목(캡션)이 인쇄되어 있지 않아, 본문 서술의 그림 번호 참조로 귀속했습니다. USP 원본 L1 컬럼의 머무름 시간은 원문에 수록되지 않았습니다. 사용한 표준품: 올라파립(CAS 763113-22-0), Related Compound A(CAS 763113-06-0), B(CAS 2250243-17-3), C(CAS 2250242-62-5) — Simson Pharma Limited 구입. RC-C는 결과표에 함께 보고되지만 원문이 적은 시스템 적합성 기준에는 포함되지 않습니다.
이 페이지는 원문의 조건을 USP 원본 vs 두 대안 컬럼 한 장으로 합쳐 간추린 것입니다. 원문 1쪽의 LC 조건 상자, 올라파립 구조식(Figure 1), 허용 조정 비교표 원본 레이아웃은 원문에서 확인하실 수 있습니다.
TN-1447 원문 보기크로마토그램 — 같은 시험을 두 컬럼으로
원문 Figure 2~13 가운데 함량 표준액과 유연물질 시스템 적합성 용액을 컬럼별로 한 장씩, 모두 4장을 실었습니다. 가로축은 분(Minutes)입니다.
Figure 2. Chromatogram of Standard Solution for Assay.
Gemini 3 µm NX-C18, 100 × 4.6 mm — 함량 표준액. 올라파립 머무름 20.596분, USP 테일링 0.99(기준 NMT 2.0). 아래 Figure 8과 비교하는 기준점입니다.
Figure 8. Chromatogram of Standar Solution for Assay.
Kinetex 2.6 µm EVO C18, 100 × 3 mm — 같은 함량 표준액. 올라파립 머무름 15.538분, USP 테일링 1.11. 원문이 말하는 약 25% 단축은 Gemini NX-C18(Figure 2, 20.596분)과의 머무름 시간 비교에 해당합니다. 주입량을 10 → 4.3 µL로 줄였음에도 피크 높이는 405930으로 Figure 2의 370454보다 높게 기록되었습니다. (캡션의 "Standar"는 원문 표기 그대로입니다.)
Figure 4. Chromatogram of System Suitability Solution for Organic Impurities.
Gemini NX-C18 — 유연물질 시스템 적합성 용액. RC-A 19.710분 · 올라파립 20.652분 · RC-B 22.165분 · RC-C 27.061분. 분리도는 RC-A/올라파립 3.46, 올라파립/RC-B 6.02. 상대 머무름(RT Ratio)은 RC-A 0.954, RC-B 1.073, RC-C 1.310입니다.
Figure 10. Chromatogram of System Suitability Solution for Organic Impurities.
Kinetex EVO C18 — 같은 용액. RC-A 14.861분 · 올라파립 15.542분 · RC-B 16.792분 · RC-C 21.417분. 분리도는 3.21과 4.55로 Figure 4보다 낮지만 기준 1.5를 충족합니다. 상대 머무름은 RC-A 0.956, RC-B 1.080, RC-C 1.378로, 네 피크의 용리 순서는 두 컬럼에서 같습니다.
데이터 해석 및 실무 제언
분석 시간 — 무엇을 기준으로 재느냐
| 기준 | 값 | 단축 |
|---|---|---|
| 올라파립 머무름 (Gemini 대비 Kinetex) | 20.596 · 15.538분 | 약 25% |
| 구배 프로그램 (USP 원본 대비 Kinetex) | 41 · 30.46분 | 약 26% |
| 구배 프로그램 (Gemini 대비 Kinetex) | 35.14 · 30.46분 | 약 13% |
원문의 "an approximate 25% reduction in analysis time compared to that obtained with the Gemini NX-C18"은 첫 줄(머무름 시간)과 맞습니다. 주입 간격을 정하는 구배 프로그램 전체로 보면 Gemini 대비 단축 폭은 약 13%입니다. 2·3행 비율은 원문 수치로 컬럼피아가 계산한 값입니다.
이동상 소비 — 런당 (유속 × 프로그램 시간)
| 조건 | 계산 | 런당 |
|---|---|---|
| USP 원본 | 2 × 41 | 약 82 mL |
| Gemini NX-C18 | 2.33 × 35.14 | 약 82 mL |
| Kinetex EVO C18 | 1.15 × 30.46 | 약 35 mL (약 57% 감소) |
원문은 용매 절감량을 직접 제시하지 않습니다. 위 값은 원문의 유속과 구배 프로그램 종료 시간을 곱한 컬럼피아 계산값이며, 주입 간 추가 평형 시간은 원문에 별도 수록되지 않아 넣지 않았습니다. Gemini NX-C18은 내경이 같아 소비량이 USP 원본과 거의 같습니다 — 절감의 대부분은 내경 축소에서 나옵니다.
분리도가 내려간 폭을 숫자로 읽어 두세요
Gemini 대비 Kinetex에서 RC-A/올라파립은 3.46 → 3.21로 소폭, 올라파립/RC-B는 6.02 → 4.55로 내려갔습니다. 둘 다 기준 1.5를 충족해 판정에는 영향이 없습니다. 다만 실제 시료에서 RC-B 근처에 원문에 없는 다른 분해산물이 있다면 이 여유가 줄어든 만큼 먼저 드러날 수 있습니다. 원문은 분리도 감소의 원인을 따로 분석하지 않았으므로, 자사 강제분해 시료로 한 번 확인해 두는 것이 안전합니다.
주입량을 줄였는데 감도는 오히려 여유가 커졌습니다
Kinetex 조건은 주입량을 10 → 4.3 µL로 줄였습니다(컬럼피아 계산 — 컬럼 단면적 비 3²/4.6² ≈ 0.43; 원문은 근거 미기재). 그런데도 감도 용액의 S/N은 Gemini 17.57, Kinetex 24.70, 유연물질 표준액 RSD는 Gemini 3.8%, Kinetex 1.81%로 기록되었습니다. 가는 컬럼에서 피크가 덜 희석되어 높이가 유지되는 효과로 읽을 수 있으나, 원문은 이 차이의 원인을 설명하지 않으므로 "이 조건의 관측값"으로 받아들이는 것이 정확합니다.
원문이 말하지 않은 것 — 배압과 기기 구성
2.6 µm · 3 mm 조건의 컬럼 배압, 사용한 Waters Arc HPLC의 검출 셀 부피·연결 배관 내경, 구배 지연 부피(dwell volume) 보정 여부는 원문에 별도 수록되지 않았습니다. 내경 3 mm 컬럼은 피크 부피가 작아져 기기 쪽 분산의 영향을 더 받으므로, 원문과 같은 테일링 1.11·분리도 3.21을 우리 기기에서 재현하려면 기기 분산부터 점검하는 편이 안전합니다.
결정 가이드 — USP 올라파립 방법, 어느 컬럼으로 수행할까?
아래는 원문 결과를 바탕으로 한 컬럼피아의 판단 기준입니다. 최종 적용은 자사 SOP와 품질 부서의 변경관리 절차를 따르십시오.
✅ Kinetex EVO C18(100 × 3 mm)이 잘 맞는 경우
- 올라파립 함량·유연물질을 배치마다 반복 시험해 런 수가 많다
- 이동상(메탄올·TFA) 구매·폐액 처리 비용을 줄이고 싶다
- 기기가 저분산 구성(작은 검출 셀·가는 배관)이거나 그렇게 맞출 수 있다
↔ Gemini NX-C18(100 × 4.6 mm)이 나은 경우
- HPLC 배관·검출 셀 등 4.6 mm 구성을 유지하고 싶다(유속 2.33 mL/min·구배 환산은 필요)
- 분리도 여유(3.46 · 6.02)를 최대한 남겨 두는 것이 시간보다 중요하다
- Gemini에서의 머무름(약 20.6분)을 유지해 기존 데이터와 비교하고 싶다
⏸ 먼저 확인이 필요한 경우
- RC-A·B·C 외의 분해산물·공정 불순물을 함께 관리한다(원문은 이 세 가지만 평가)
- 기기의 구배 지연 부피가 크다 — 원문은 dwell volume 보정을 언급하지 않음
- 허용 조정 적용 시 자사 규정이 요구하는 추가 검증 항목이 정해져 있지 않다
Ph. Eur. 초안(draft) 모노그래프 판 — TN-1448
TN-1448 «Ph. Eur. Method Modernization of Assay and Related substances in Olaparib»은 위 TN-1447과 다른 문서입니다. 같은 두 대안 컬럼(Gemini 3 µm NX-C18, Kinetex 2.6 µm EVO C18)을 쓰되, 기준 방법이 Ph. Eur. 초안(draft) 모노그래프의 함량(Assay)·유연물질(Related Substances) 방법인 별도 측정입니다(저자진 일부 공통). 구배·이동상 표기·시스템 적합성 기준이 USP 방법과 다르고, 크로마토그램과 결과값도 따로 얻은 것입니다. 이 섹션 위에서 «원문»이라 적은 것은 모두 TN-1447입니다.
초안(draft) 모노그래프 기준입니다
TN-1448 원문은 «Ph. Eur. draft monograph methods»를 기준으로 했다고 적습니다. 확정·공표된 모노그래프와 같은 조건이라는 근거는 원문에 없습니다. 자사 시험에 적용하기 전에 현행 Ph. Eur. 공표본의 컬럼·구배·시스템 적합성 기준을 직접 확인하십시오.
TN-1447(USP) vs TN-1448(Ph. Eur. 초안) — 무엇이 같고 무엇이 다른가
| 항목 | TN-1447 · USP | TN-1448 · Ph. Eur. 초안 모노그래프 |
|---|---|---|
| 기준 공정서 | USP 모노그래프 | Ph. Eur. 초안(draft) 모노그래프 |
| 모노그래프 지정 컬럼 | L1, 100 × 4.6 mm, 3.5 µm | end-capped 에틸렌 가교 옥타데실실릴 실리카(하이브리드 재질), 100 × 4.6 mm, 3.5 µm |
| 대안 컬럼 (두 노트 공통) | Gemini 3 µm NX-C18 100 × 4.6 mm(완전다공성) · Kinetex 2.6 µm EVO C18 100 × 3 mm(코어셀) | 같음 — Gemini 3 µm NX-C18 100 × 4.6 mm(완전다공성) · Kinetex 2.6 µm EVO C18 100 × 3 mm(코어셀) |
| L/dp (원본 · Gemini · Kinetex) | 28.57 · 33.33 · 38.46 | 28.57 · 33.33 · 38.46 |
| 유속 (원본 · Gemini · Kinetex, mL/min) | 2 · 2.33 · 1.15 | 2 · 2.33 · 1.15 |
| 원본 구배 시간 (분) / %B | 0 · 35 · 37 · 38 · 38.1 · 41 / 0 → 55 → 90 → 90 → 0 → 0 | 0 · 2 · 37 · 39 · 40 · 41 · 45 / 0 → 0 → 55 → 90 → 90 → 0 → 0 |
| 환산 구배 — Gemini NX-C18 (분) | 0 · 30 · 31.71 · 32.57 · 32.66 · 35.14 | 0 · 1.71 · 31.71 · 33.43 · 34.29 · 35.14 · 38.57 |
| 환산 구배 — Kinetex EVO C18 (분) | 0 · 26 · 27.49 · 28.23 · 28.3 · 30.46 | 0 · 1.49 · 27.49 · 28.97 · 29.71 · 30.46 · 33.43 |
| 이동상 | A 메탄올/물(5:95), B 메탄올/물(95:5), 각 1 L당 TFA 0.6 mL | A TFA/메탄올/물(0.6:50:950), B TFA/물/메탄올(0.6:50:950) |
| 온도 · 검출 · 주입량 (원본 · Gemini · Kinetex) | 50 °C · UV 276 nm · 10 · 10 · 4.3 µL | 50 °C · UV 276 nm · 10 · 10 · 4.3 µL |
| 장비 | Waters Arc HPLC (PDA) | Waters Arc HPLC (PDA) |
| 시험 용액 명칭 | 표준액 · 시스템 적합성 용액 · 감도 용액 | 참조액(reference solution) (a) · (b) · (c) |
| 불순물 명칭 | Related Compound A · B · C | Impurity A · B · C (원문 CAS 번호는 두 노트에서 같음) |
| 원문이 수치로 적은 시스템 적합성 기준 | 테일링 NMT 2.0 · RSD NMT 0.73% / NMT 5.0% · 분리도 NLT 1.5(2쌍) · S/N NLT 10 | 분리도 최소 1.5 — 불순물 A–올라파립, 올라파립–불순물 B (참조액 (b)) |
※ TN-1448 열은 원문 1쪽 Table 1(«Ph. Eur. Allowable changes and method comparison»)과 LC 조건 상자, Introduction에서 옮겼습니다. 허용 조정 문구(L/dp −25% ~ +50%, 선속도 유지 유속 조정과 추가 ±50%, 구배 부피 : 컬럼 부피 비 유지, 온도 ±10 °C, 파장 변경 불가, 주입량 감량 허용)는 Table 1에서 TN-1447 표와 같은 문구로 적혀 있습니다. Table 1의 원본 방법 열 머리글은 원문에 «USP monograph Method»로 인쇄되어 있으나, 표 제목과 구배 값(45분 프로그램)은 Ph. Eur. 방법의 것이므로 이 페이지는 Ph. Eur. 초안 방법의 값으로 옮겼습니다. LC 조건 상자의 «Flow Rate 2 mL/min · Injection Volume 10 µL»는 TN-1447과 마찬가지로 원본 조건 값이며, 컬럼별 값은 Table 1을 따랐습니다. 이동상 시약은 원문 표기 «Trifluoroacetic Acid R / Methanol R / Water for Chromatography R»입니다. 표준품은 두 노트 모두 Simson Pharma Limited 구입으로 적혀 있습니다.
TN-1448 시스템 적합성 결과
| 시험 · 항목 | 원문 기준 | Gemini NX-C18 | Kinetex EVO C18 |
|---|---|---|---|
| 분리도 불순물 A / 올라파립 (참조액 b) | 최소 1.5 | 3.44 (Fig. 4) | 3.23 (Fig. 8) |
| 분리도 올라파립 / 불순물 B (참조액 b) | 최소 1.5 | 5.96 (Fig. 4) | 4.55 (Fig. 8) |
| 함량 · 면적 RSD (참조액 a, N=6) | 원문에 수치 미기재 | 0.06% (Fig. 3) | 0.06% (Fig. 7) |
| 감도 · 올라파립 피크 높이 (참조액 c) | 원문에 수치 미기재 | 385 (Fig. 5) | 457 (Fig. 9) |
| 올라파립 머무름 (참조액 a, 함량) | — | 21.791분 (Fig. 2) | 16.972분 (Fig. 6) |
※ 값은 TN-1448 원문 각 Figure 아래 결과표에서 옮겼습니다(Figure 2·3·4·5 = Gemini NX-C18, Figure 6·7·8·9 = Kinetex EVO C18). 원문이 수치로 적은 시스템 적합성 기준은 분리도뿐이며, 원문은 이 분리도 요건이 함량·유연물질 두 시험에 공통이라고 적습니다. 원문 본문은 «피크 대칭성·분리도·% RSD가 모두 Ph. Eur. 시스템 적합성 기준을 충족했다»고 적지만, 대칭성 값(대칭 계수 등)은 결과표에 없고 RSD·감도의 기준 수치도 원문에 별도 수록되지 않았습니다. TN-1447의 S/N 항목에 해당하는 값은 TN-1448에 보고되지 않았습니다.
TN-1448 크로마토그램 — 참조액 (b), 두 컬럼
분리도 기준을 판정하는 참조액 (b)의 그림을 컬럼별로 한 장씩 실었습니다. 가로축은 분(Minutes)이며, 위 TN-1447 그림과는 다른 측정입니다.
TN-1448
Figure 4. Chromatogram of Reference Solution (b) for Related Substances
Gemini 3 µm NX-C18, 100 × 4.6 mm — 참조액 (b). 불순물 A 20.864분 · 올라파립 21.771분 · 불순물 B 23.226분 · 불순물 C 28.259분. 분리도는 불순물 A/올라파립 3.44, 올라파립/불순물 B 5.96(기준 최소 1.5). 상대 머무름(RT Ratio)은 A 0.958, B 1.067, C 1.298입니다.
TN-1448
Figure 8. Chromatogram of Reference Solution (b) for Related Substances
Kinetex 2.6 µm EVO C18, 100 × 3 mm — 같은 참조액 (b). 불순물 A 16.299분 · 올라파립 16.972분 · 불순물 B 18.212분 · 불순물 C 22.869분. 분리도는 3.23과 4.55로 Figure 4보다 낮지만 기준 1.5를 충족합니다. 상대 머무름은 A 0.960, B 1.073, C 1.347이며 네 피크의 용리 순서는 두 컬럼에서 같습니다. 불순물 B의 면적 백분율은 Figure 4의 0.09%와 달리 0.30%로 기록되었고, 원문은 이 차이를 설명하지 않습니다.
두 노트의 머무름 시간을 서로 비교하지 마십시오
Ph. Eur. 초안 방법은 시작 0 %B 구간(원본 2분)을 두고 45분에 끝나는, USP 방법(41분)과 다른 구배 프로그램입니다. 같은 Gemini NX-C18이라도 함량 시험 올라파립 머무름은 TN-1447 20.596분, TN-1448 21.791분으로 기록되어 같은 조건의 값이 아닙니다(차이의 원인은 어느 원문도 적지 않았습니다). 비교는 같은 노트 안에서 Gemini 대 Kinetex로 읽어야 합니다.
TN-1448 안에서의 시간·용매 — 컬럼피아 계산
원문은 «분석 시간 단축»을 적었지만 비율은 제시하지 않았습니다. 원문 수치로 계산하면 함량 시험 올라파립 머무름은 Gemini 21.791분 → Kinetex 16.972분으로 약 22%, 구배 프로그램 전체는 38.57분 → 33.43분으로 약 13%(원본 45분 대비 약 26%) 짧습니다. 런당 이동상(유속 × 프로그램 시간)은 원본 약 90 mL(2 × 45), Gemini 약 90 mL(2.33 × 38.57), Kinetex 약 38 mL(1.15 × 33.43)로 약 57% 적습니다 — 주입 간 추가 평형 시간은 원문에 별도 수록되지 않아 넣지 않았습니다.
분리도 여유는 USP 판과 같은 방향으로 줄었습니다
TN-1448에서도 Kinetex의 분리도(3.23 · 4.55)는 Gemini(3.44 · 5.96)보다 낮고, 둘 다 기준 1.5를 충족합니다. 특히 올라파립/불순물 B 쌍이 더 크게 내려간 점은 TN-1447(6.02 → 4.55)과 같은 경향입니다. 원문은 원인을 분석하지 않았으므로, 자사 시료에 불순물 B 근처의 다른 피크가 있다면 확인해 두는 편이 안전합니다.
참고 자료 및 원문
TN-1447: Method Modernization of Assay and Organic Impurities in Olaparib per USP
Trivikram Reddy Gundala, PhD, Rajesh Babu Dandamudi, PhD (India Phenologix Lab, Phenomenex India); Sean Orlowicz (Phenomenex Inc., Torrance, CA)
TN-1448: Ph. Eur. Method Modernization of Assay and Related substances in Olaparib
Trivikram Reddy Gundala, PhD, Rajesh Babu Dandamudi, PhD (India Phenologix Lab, Phenomenex India); Heiko Behr, PhD (Phenomenex Ltd. Deutschland); Sean Orlowicz (Phenomenex Inc., Torrance, CA) — Ph. Eur. 초안(draft) 모노그래프 기준
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