Lys C Protease for Improvements in Peptide Mapping Workflows.PDF

분야: 바이오제약

소개

본 문서는 단백질 특성화에서 널리 사용되는 펩타이드 맵핑 작업을 개선하기 위해 Lys-C 프로테아제를 활용하는 방법에 대해 설명합니다. 일반적인 워크플로우에서는 단백질의 분리를 거쳐 트립신과 같은 세린 프로테아제를 사용하여 펩타이드 생성 후, LC와 UV 또는 MS 기법을 통해 분리 및 분석됩니다. 그러나 트립신은 특히 라이신에서 미스 클리브지를 일으킬 수 있어 Lys-C를 보조 소화에 활용하는 것이 일반적입니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen TM 2.6 µm Peptide XB-C18
• Dimension: 150 x 2.1 mm
• Part No.: 00F-4768-AN
• Recommended Guard: SecurityGuard™ ULTRA (AJ0-9806)
• Guard Holder Part No.: AJ0-9000
• 이동상:
  • A: 0.1 % Formic Acid in Water
  • B: 0.1 % Formic Acid in Acetonitrile
• 유속: 0.3 mL/min
• 그라디언트: 1-50% B in 50 minutes
• 온도: 40 °C
• Detector: Q-TOF (SCIEX ® X500B)
• Sample: Digested NIST mAb

핵심 기술 요소

• 트립신만을 사용한 소화에서는 267개의 고유 펩타이드가 생성되었으며, 트립신/Lys-C를 사용한 경우 288개로 증가했습니다.
• DMIF 펩타이드는 트립sin/Lys-C 소화에서 더 많이 회수되어 정보 종속적 획득 (IDA) MS/MS 실험을 통해 식별되었습니다.

응용 분야

• 단백질 특성화를 위한 펩타이드 맵핑 워크플로우의 개선

결론 및 권장사항

트립신/Lys-C 소화는 트립신만 사용한 경우보다 91.6%의 중쇄 시퀀스 커버리지를 달성하여, 펩타이드 맵핑 워크플로우를 개선하는 데 효과적입니다. 따라서 미스 클리브지나 소화 효율성을 극복하기 위해 Lys-C 프로테아제의 사용을 권장합니다.

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