Native RPLC-HRMS Method Development Approach for the Rapid Characterization of Antibody Drug Conjugates.PDF

분야: 시료전처리

소개

본 문서는 항체-약물 Conjugates (ADCs)의 빠르고 포괄적인 특성화를 위한 native RPLC-HRMS 방법 개발 접근법을 설명하고 있습니다. 특히, 다양한 ADC들의 평균 DAR 값과 위치 이소체들을 분리 및 식별하는 데 중점을 두었습니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen Native RP
  • 차원: 50 x 2.1 mm
• 이동상:
  • A: 물에 용해된 50 mM 아세트아미늄
  • B: 이소프로필 알코올 / 물에 용해된 50 mM 아세트아미늄 (50:50, v/v)
• 경도:
  • 시간(min) %B
    • 0.00 0
    • 2.00 0
    • 5.00 15
    • 20.0 50
    • 24.0 50
    • 26.0 100
    • 27.0 100
    • 27.1 0
    • 30.0 0
• 유속: 0.2 ml/min
• 주입량: 100 µg ADC
• 온도: 35 °C

핵심 기술 요소

• 다양한 ADC의 평균 DAR 값을 결정하기 위한 native RPLC-HRMS 방법 개발.
• 고정상의 수분성에 따른 각각의 DAR 종류의 머무름 시간과 선택성을 조절하는 컬럼 선택 접근법.
• 모든 DAR 종류, 특히 위치 이소체들의 분리능을 최적화한 HRMS 스펙트럼.

응용 분야

• 항암제 및 표적 치료 연구에서 ADC의 빠른 특성화.
• 다양한 ADC에 대한 평균 DAR 값 계산과 MS 식별.

결론 및 권장사항

본 연구는 native RPLC-HRMS 방법을 사용하여 여러 종류의 ADC를 분리하고, 모든 DAR 종류와 위치 이소체들을 정확하게 식별하는 데 성공했습니다. 특히 bioZen Native RP-5 컬럼이 가장 효과적이었으며, 이를 통해 평균 DAR 값과 MS 응답을 일관되게 측정할 수 있었습니다. 향후 연구에서는 이러한 방법론을 다양한 ADC에 적용하여 더 많은 데이터를 확보하고자 합니다.

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