Optimization of a Gradient Profile on Reversed Phase Separations of Monoclonal Antibodies Using Biozen WidePore C4.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 bioZen WidePore를 사용한 기울기 최적화 방법을 설명하며, 특히 단일클론 항체(mAbs)의 정제 분석에 초점을 맞추고 있다. 이 연구에서는 HPLC를 이용해 mAb의 변형과 편차를 평가하는 데 있어 bioZen WidePore C4 컬럼이 어떻게 유용한지 설명하고 있다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 2.6 µm WidePore C4, Dimensions: 100 x 2.1 mm
• 이동상 A: Water with 0.1% TFA
• 이동상 B: Acetonitrile with 0.1% TFA
• 그라디언트: 6 minutes (25-45% B)
• 유속: 0.5 mL/min
• 온도: 90°C
• 검출기 설정: UV-Vis @ 280 nm, UV-Vis @ 214 nm
• 주입량: 2 µL

핵심 기술 요소

• bioZen WidePore C4 컬럼을 사용한 mAb의 정제 분석에서 그라디언트를 얕게 조정하면, 가까운 엘루션 시간에 있는 임피리티의 분리능이 향상된다.
• 그러나 그라디언트가 얕아지면 피크 높이 감소와 피크 너비 증가로 인해 정량화에 어려움을 겪을 수 있다.

응용 분야

• 단일클론 항체의 변형 및 편차 평가를 위한 LC-UV 임피리티 분석.
• LC-MS를 이용한 mAb의 기본 시퀀스 확인.

결론 및 권장사항

bioZen WidePore C4 컬럼을 사용하여 그라디언트를 얕게 조정하면, 가까운 엘루션 시간에 있는 임피리티 분리를 향상시킬 수 있다. 그러나 이로 인해 피크 너비가 증가하고 높이가 감소할 수 있으므로 추가적인 방법 파라미터 최적화(온도 및 유속 조정)를 고려해야 한다.

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