Optimized Solid-Phase Extraction of GalNAc-Conjugated siRNA from Plasma and Liver Matrices Using Clarity OTX Pro.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 GalNAc-conjugated siRNA를 플라즈마와 간 S9 분획에서 효과적으로 추출하고 정량화하는 방법을 설명합니다. 특히, Clarity OTX Pro 키트를 사용하여 Inclisiran의 센스 및 안티센스 체인을 높은 재현성과 민감도로 측정할 수 있는 기술적 접근법에 초점을 맞추고 있습니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: Prototype for Larger Oligonucleotides
  • 차원: 150 x 2.1 mm
• 이동상:
  • A: Water with 1% Hexafluoroisopropanol (HFIP) and 0.1% N,N-diisopropylethylamine (DIPEA)
  • B: Acetonitrile / Water / Isopropanol (60:20:20 v/v) with 0.750 % HFIP and 0.350 % DIPEA
• 유속:
  • Gradient 동안: 280 µL/min
  • 세척 및 재균형화 동안: 500 µL/min
• 주입량: 5 µL
• 온도: 80 °C

핵심 기술 요소

1. Clarity OTX Pro 키트를 사용한 단계별 고체상 추출(SPE) 방법은 GalNAc-conjugated siRNA의 효율적인 추출 및 정량화에 효과적입니다.
2. Proteinase K 처리는 간 S9 분획에서 Inclisiran의 회수율을 약 14% 향상시킵니다.
3. 2 mg/well 플레이트를 사용하면 센스 가닥(SS)의 LLOQ가 3배, 안티센스 가닥(AS)의 LLOQ는 10배 낮아집니다.

응용 분야

• 플라즈마: Inclisiran AS와 SS의 회수율은 각각 ≥87.6% 및 ≥84.7%, LLOQ는 각각 8 ng/mL, 31 ng/mL입니다.
• 간 S9 분획: Proteinase K 처리를 통해 추출 효율이 향상되며, AS의 회수율은 2–6000 ng/mL 범위에서 ≥80.4%로 측정됩니다.

결론 및 권장사항

Clarity OTX Pro 키트는 플라즈마와 간 S9 분획에서 GalNAc-conjugated siRNA의 고감도 추출과 정량화에 효과적인 방법을 제공합니다. 특히, 2 mg/well 플레이트를 사용하면 센스 가닥(SS)의 LLOQ가 3배 낮아지고 안티센스 가닥(AS)은 10배 더 민감하게 측정할 수 있습니다. 이러한 접근법을 통해 Inclisiran과 같은 siRNA 치료제에 대한 정확한 약동학적 연구를 수행하는 데 필요한 고도의 재현성 및 감도가 달성됩니다.

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이 요약은 원문에서 제공된 정보를 바탕으로 작성되었으며, 모든 수치와 단위는 원본 그대로 유지되었습니다.

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